油酸調(diào)節(jié)水甘油通道蛋白在肝臟中表達(dá)的相關(guān)信號(hào)分子機(jī)制.pdf

1、目的:研究油酸在非酒精性脂肪變性肝細(xì)胞模型中誘導(dǎo)水甘油通道蛋白(aquaglyceroporins) AQP3、AQP9表達(dá)改變的相關(guān)信號(hào)分子機(jī)制。
　　 方法:采用不同濃度油酸干預(yù)人肝癌HepG2細(xì)胞構(gòu)建非酒精性脂肪變性肝細(xì)胞模型，油紅O染色及OD值測(cè)定分析肝細(xì)胞脂肪變性程度，實(shí)時(shí)熒光定量PCR與Western blot方法確定油酸誘導(dǎo)AQP3、AQP9表達(dá)變化的最佳濃度，然后以油酸最佳干預(yù)濃度以及不同信號(hào)通路抑制劑分別聯(lián)合誘

2、導(dǎo)HepG2細(xì)胞，以常規(guī)培養(yǎng)的HepG2細(xì)胞為對(duì)照組，利用qRT-PCR和Western blot方法檢測(cè)分析參與油酸鈉誘導(dǎo)AQP3、AQP9表達(dá)水平改變的相關(guān)信號(hào)分子機(jī)制。
　　 結(jié)果:油紅O染色及其OD值測(cè)定結(jié)果顯示隨著油酸誘導(dǎo)濃度的升高(0-500μmol/L)，脂肪變性程度逐漸加重，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)。qRT-PCR和Western blot方法檢測(cè)結(jié)果表明油酸的刺激可以下調(diào)AQP3的表達(dá)量而上調(diào)AQP9的

3、表達(dá)，其作用均呈劑量依賴(lài)性，確定500μmol/L作為油酸干預(yù)的最佳刺激濃度。qRT-PCR檢測(cè)不同信號(hào)通路抑制劑干預(yù)對(duì)油酸誘導(dǎo)AQPs表達(dá)改變的結(jié)果表明，油酸對(duì)AQP3 mRNA的抑制作用僅能被SB203580逆轉(zhuǎn);對(duì)AQP9 mRNA而言，LY294004的干預(yù)能夠增強(qiáng)油酸的刺激作用，SB203580則能抑制其表達(dá)上調(diào);PD98059和SP600125的干預(yù)則無(wú)明顯作用。AQP3、AQP9蛋白表達(dá)的改變同基因水平基本一致。進(jìn)一步研究

4、表明，油酸的刺激作用可使Akt磷酸化水平下降而p38磷酸化水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。p-ERK1/2和p-JNK水平無(wú)明顯改變。
　　 結(jié)論:油酸可呈劑量依賴(lài)方式誘導(dǎo)AQP3表達(dá)量下降而AQP9表達(dá)量升高，其中PI3K/Akt信號(hào)通路的抑制參與了油酸對(duì)AQP3表達(dá)量的下調(diào)，而AQP9的調(diào)節(jié)還涉及了p38 MAPK途徑的激活，表明油酸在非酒精性脂肪變性肝細(xì)胞模型中是通過(guò)不同信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路調(diào)節(jié)AQP3和AQP9的表達(dá)