PCR檢測(cè)大鼠血液及腹水中細(xì)菌DNA對(duì)腸道吻合口漏的早期診斷價(jià)值.pdf

1、研究背景:吻合口漏是腸道手術(shù)術(shù)后一組嚴(yán)重的并發(fā)癥，各家報(bào)告其發(fā)生率不一，國(guó)外報(bào)告結(jié)直腸瘺為4％-15％。一旦發(fā)生，病程變化很快，如不能及時(shí)診治，可出現(xiàn)繼發(fā)性腹膜炎、敗血癥、全身炎癥反應(yīng)綜合征(SIRS)、多器官功能衰竭(MOF)等并發(fā)癥，危及生命。因此，早期診斷與及時(shí)處理吻合口漏是改善預(yù)后、降低疾病死亡率的關(guān)鍵。吻合口漏早期發(fā)生隱匿，目前仍缺乏有效的早期診斷方法，往往是通過(guò)后期典型腸瘺的臨床表現(xiàn)才得以確診。尋找一個(gè)既符合臨床需要，又簡(jiǎn)便

2、迅速、準(zhǔn)確客觀的方法，從而能有效輔助吻合口漏的早期診斷，一直是眾多研究者關(guān)注的焦點(diǎn)和從事胃腸臨床工作者的一種渴求。本實(shí)驗(yàn)利用wistar大鼠建立不同腸段的常規(guī)腸切除腸吻合及腸漏模型，應(yīng)用PCR技術(shù)動(dòng)態(tài)檢測(cè)大鼠血液及腹水中細(xì)菌DNA(大腸桿菌的lacZ基因和多數(shù)細(xì)菌共有的16SrRNA基因)，研究不同樣本的lacZ基因和16SrRNA基因的PCR檢測(cè)對(duì)空、回、結(jié)腸腸吻合口早期診斷的價(jià)值。 目的:研究與探討應(yīng)用PCR檢測(cè)大鼠血液及腹

3、水中細(xì)菌DNA對(duì)腸道吻合口漏的早期診斷價(jià)值。 方法:健康wistar雌性大鼠65只，隨機(jī)分成：A組(n=5)為假手術(shù)組，只翻動(dòng)腸管，不行特殊處理；B組(n=10)為結(jié)腸-結(jié)腸吻合組，C組(n=10)為結(jié)腸吻合口漏組，兩組在距回盲部以下約10cm處用血管鉗阻斷約3cm長(zhǎng)結(jié)腸腸管的血流并用0號(hào)線結(jié)扎血管，斜形切除此段腸管后，B組用0號(hào)絲線行端端吻合(單層間斷吻合)，C組用0號(hào)線行后壁和兩側(cè)壁的單層間斷吻合，留前壁5mm不吻合；D組(

4、n=10)為空腸-空腸吻合組，E組(n=10)為空腸吻合口漏組，F(xiàn)組(n=10)為回腸-回腸吻合組，G組(n=10)為回腸吻合口漏組，D、E兩組于Treitz韌帶以下15cm處用血管鉗阻斷約3cm長(zhǎng)腸管的血流，0號(hào)線結(jié)扎血管，斜形切除此段腸管，D組用0號(hào)絲線行端端吻合(單層間斷吻合)，E組用0號(hào)線行后壁和兩側(cè)壁的單層間斷吻合，留前壁5mm不吻合。F、G組于回盲部以上約15cm處用血管鉗阻斷約3cm長(zhǎng)腸管的血流并用0號(hào)線結(jié)扎血管，斜形切除

5、此段腸管后，F(xiàn)組用0號(hào)絲線行端端吻合(單層間斷吻合)，G組均用0號(hào)線行后壁和兩側(cè)壁的單層間斷吻合，留前壁5mm不吻合。其中B、C兩組構(gòu)成Ⅰ大組，為結(jié)腸吻合口實(shí)驗(yàn)組，D、E、F、G構(gòu)成Ⅱ大組，為空、回腸吻合口實(shí)驗(yàn)組。A組和第Ⅰ組于術(shù)后第3天及術(shù)后第6天取靜脈血1mL和3mL。第Ⅱ組于術(shù)后36小時(shí)取靜脈血1mL，術(shù)后72小時(shí)取血3mL及腹水1-2mL。以酚抽提法提取血液及腹水中DNA，PCR擴(kuò)增大腸桿菌的lacZ基因和細(xì)菌共有的16SrRN

6、A基因，所得數(shù)據(jù)行卡方檢驗(yàn)處理，取腸管標(biāo)本HE染色做病理學(xué)檢查，觀察其在不同吻合情況下的損傷程度。 結(jié)論: 1、以PCR方法檢測(cè)術(shù)后外周血中大腸桿菌lacZ基因?qū)Y(jié)腸吻合口漏的診斷有一定的意義，而以PCR血中細(xì)菌16SrRNA基因?qū)Y(jié)腸吻合口漏的意義不大。 2、以PCR方法檢測(cè)術(shù)后外周血中大腸桿菌lacZ基因?qū)铡⒒啬c吻合口漏的意義不大，PCR檢測(cè)術(shù)后腹水中l(wèi)acZ基因?qū)铡⒒啬c吻合口漏的診斷均有意義，且與外周血

7、相比，能較大提高空、回腸吻合口漏的診斷率。 3、以PCR方法檢測(cè)術(shù)后外周血和腹水中細(xì)菌16SrRNA基因?qū)?、回腸吻合口漏的診斷均有一定意義，但使用腹水標(biāo)本與外周血進(jìn)行檢測(cè)相比，不能顯著提高空、回腸吻合口漏的診斷率。 4、以術(shù)后外周血為標(biāo)本對(duì)空、回腸吻合口漏的診斷中，PCR檢測(cè)細(xì)菌16SrRNA基因的意義較大，可能優(yōu)于以PCR檢測(cè)大腸桿菌的lacZ基因，而以術(shù)后腹水為標(biāo)本時(shí)，兩組靶基因的差異不大；以術(shù)后外周血為標(biāo)本對(duì)結(jié)腸