Edu標(biāo)記SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：使用不同濃度的Edu標(biāo)記SD大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，探討Edu標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的最佳濃度及時(shí)間組合。
　　方法：（1）采用全骨髓貼壁法分離純化骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，觀察細(xì)胞形態(tài)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期和表面標(biāo)記物，成骨成脂分化誘導(dǎo)鑒定。（2）分別采用0，10，20，50umol/L濃度的Edu及12，24，48，72h的標(biāo)記時(shí)間標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，流式細(xì)胞儀測(cè)定標(biāo)記率。挑選出12，24，48，72h時(shí)最優(yōu)的標(biāo)記濃度，檢測(cè)各濃

2、度、各時(shí)間點(diǎn)Edu標(biāo)記細(xì)胞的陽(yáng)性率，觀察標(biāo)記后細(xì)胞形態(tài)，并繪制標(biāo)記細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線以及進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記后細(xì)胞活性檢測(cè)，增殖及誘導(dǎo)分化實(shí)驗(yàn)。
　　結(jié)果：（1）骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的鑒定：形態(tài)學(xué)特征：接種24-48h后，出現(xiàn)貼壁細(xì)胞，多為圓形、短梭型、多角形，傳至第三代時(shí)細(xì)胞形態(tài)均一，呈單層貼壁生長(zhǎng)，細(xì)胞多為長(zhǎng)梭形，呈旋渦狀排列；流式細(xì)胞檢測(cè)其表面標(biāo)記物CD90、CD29、CD45和CD11b表達(dá)分別為94.3％、99.4%、3.2%、5.7%

3、；經(jīng)成脂誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)14天后油紅O染色，倒置顯微鏡下觀察可見(jiàn)橘紅色脂滴，經(jīng)成骨誘導(dǎo)劑誘導(dǎo)21天后茜素紅染色，鏡下可見(jiàn)橘紅色鈣結(jié)節(jié)，堿性磷酸酶染色，鏡下可見(jiàn)藍(lán)紫色鈣結(jié)節(jié)形成。（2）各濃度組標(biāo)記率隨標(biāo)記時(shí)間延長(zhǎng)而升高（P<0.05）；各時(shí)間點(diǎn)標(biāo)記率隨標(biāo)記濃度的升高而增加，但其差別無(wú)顯著性意義（P>0.05）。通過(guò)各實(shí)驗(yàn)，得出最適濃度組合10umol/L48h。
　　結(jié)論： Edu標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞簡(jiǎn)單有效，體外標(biāo)記SD大鼠骨髓間充質(zhì)干