磁標(biāo)記骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療糖尿病的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、研究背景:間充質(zhì)干細(xì)胞可自骨髓等多種組織分離得到，近年來(lái)，間充質(zhì)干細(xì)胞移植已經(jīng)成為心血管疾病，神經(jīng)系統(tǒng)疾病等多種疾病治療的種子細(xì)胞。 研究目的:本實(shí)驗(yàn)采用磁共振成像(MRI)進(jìn)行標(biāo)記細(xì)胞的體外示蹤及移植細(xì)胞的糖尿病體內(nèi)示蹤，探討不同濃度及時(shí)間超順磁性氧化鐵顆粒(SPIO)標(biāo)記兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(MSCs)的標(biāo)記效率、標(biāo)記后活力以及標(biāo)記后體外成像情況，為臨床體內(nèi)MRI尋找最佳標(biāo)記“濃度——時(shí)間”。嘗試在常規(guī)1.5T磁共振(MR)的

2、成像條件下，對(duì)較小動(dòng)物兔的胰腺、腎臟等器官進(jìn)行解剖成像和移植細(xì)胞的示蹤；初步動(dòng)態(tài)觀察移植細(xì)胞在糖尿病兔體內(nèi)的活體成像特點(diǎn)及規(guī)律，為臨床干細(xì)胞移植治療糖尿病療效評(píng)估開創(chuàng)新方法。 研究方法:(1)MSCs的培養(yǎng)及鑒定。選擇健康家兔，采用密度梯度離心法和貼壁篩選法分離、培養(yǎng)、純化骨髓MSCs，觀察細(xì)胞在光鏡下的生長(zhǎng)特征并記錄其生長(zhǎng)曲線，VonKassa方法檢測(cè)成骨誘導(dǎo)骨髓MSCs，對(duì)所獲得的細(xì)胞進(jìn)行表面抗原(CD44、CD45和CD7

3、1)的檢測(cè)，確定所獲細(xì)胞絕大多數(shù)為骨髓MSCs。(2)標(biāo)記細(xì)胞的體外成像。配制不同濃度含SPIO的培養(yǎng)基(鐵終濃度分別為25μg/ml、50μg/ml、75μg/ml、100μg/ml、150μg/ml)，加入骨髓MSCs孵育標(biāo)記。標(biāo)記后1天、3天、1周、2周、3周、4周行普魯士藍(lán)染色、細(xì)胞活力檢測(cè)及標(biāo)記細(xì)胞體外MRI，并經(jīng)MRI確定合適的標(biāo)記時(shí)間和標(biāo)記濃度。(3)移植細(xì)胞糖尿病兔MRI括體示蹤。制備兔糖尿病模型，將SPIO標(biāo)記的骨髓M

4、SCs和未標(biāo)記的骨髓MSCs經(jīng)靜脈移植入糖尿病兔體內(nèi)，用測(cè)定血糖的方法評(píng)價(jià)細(xì)胞移植前、后對(duì)糖尿病高血糖的治療效果。同時(shí)經(jīng)MR動(dòng)態(tài)觀察移植細(xì)胞的定位、存活及遷徙。 研究結(jié)果:(1)骨髓MSCs培養(yǎng)、鑒定：骨髓MSCs呈梭形、漩渦狀生長(zhǎng)。骨髓MSCs經(jīng)成骨誘導(dǎo)后表達(dá)骨細(xì)胞特征。流式細(xì)胞儀表面標(biāo)志鑒定CD45呈陰性，CD44、CD71呈陽(yáng)性。(2)SPIO可有效標(biāo)記MSCs，細(xì)胞活力檢測(cè)顯示時(shí)間為1天和3天時(shí)，劑量0μg/ml組與25

5、μg/ml組，0μg/ml組與50μg/ml組，25μg/ml組與50μg/ml組的細(xì)胞拒感率沒(méi)有差別(P＞0.05)。體外MRI示標(biāo)記3天時(shí)，標(biāo)記濃度為50μg/ml組，T2WI及T2*WI信號(hào)降低最明顯。(3)建立了兔糖尿病模型，其血糖穩(wěn)定＞16.8mmol/L。血糖檢測(cè)顯示MSCs移植可有效降低糖尿病血糖升高，MRT2WI、T2*WI序列均可示蹤糖尿病兔體內(nèi)移植SPIO標(biāo)記骨髓MSCs。MRI可對(duì)標(biāo)記細(xì)胞示蹤至注射后10天。