APE1血清學(xué)檢測方法的建立及其在肺癌診斷中的應(yīng)用.pdf

1、第三軍醫(yī)大學(xué)碩士學(xué)位論文APE1血清學(xué)檢測方法的建立及其在肺癌診斷中的應(yīng)用姓名：曹曉靜申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)指導(dǎo)教師：王東20090501第三軍醫(yī)大學(xué)碩十學(xué)位論文用價值。研究內(nèi)容和方法1兔抗人APEl多克隆抗血清的制備用純化的全長APEl蛋白免疫新西蘭大白兔，采用一種快速免疫法制備APEl多克隆抗體，ELIsA追蹤檢測抗體效價，ProteinA親和層析法純化特異性IgG抗體，Westemblot和免疫組化檢測抗體的特

2、性，為進一步建立雙抗體夾心ELISA提供抗體。2改良的雙抗體夾心ELISA檢測血清APEl蛋白方法的建立以鼠抗人APEl單克隆抗體包被高親和力酶標板，APEl全長蛋白為標準品，兔抗人APEl多克隆抗體為檢測抗體，HRP標記羊抗兔IgG為酶標抗體建立雙抗體夾心ELIsA，棋盤滴定法確定各抗體的最佳工作濃度并對ELISA方法的靈敏度、特異度和穩(wěn)定性進行檢測。采用所建立的ELISA方法檢測肺癌患者和健康體檢者血清并結(jié)合蛋白芯片檢測結(jié)果進行統(tǒng)計

3、學(xué)分析，探討其臨床意義。3間接ELISA檢測血清APEl抗體方法的建立以全長APEl蛋白包被高結(jié)合力酶標板，HRP標記羊抗人IgG為酶標抗體建立間接ELIsA。采用所建立的ELIsA方法檢測肺癌患者和健康體檢者血清并結(jié)合蛋白芯片檢測結(jié)果進行統(tǒng)計學(xué)分析，從不同角度探討其臨床應(yīng)用價值。研究結(jié)果1成功制備了兔抗人APEl多克隆抗體。ELISA檢測顯示該抗體的效價達到1：128000，相對親和力常數(shù)為896lO擊mo兒。westemblot和免

4、疫組化顯示該抗體能與APEl蛋白特異性結(jié)合。此外，該抗體還可用于小鼠和大鼠組織APEl蛋白的檢測。2建立的夾心ELISA檢測APEl蛋白的線性范圍為8O～200n∥IIlL；批內(nèi)變異系數(shù)為837％～897％，批間變異系數(shù)為lO47％～1457％；平均回收率為9083％。血清中APEl蛋白含量呈偏態(tài)分布，健康體檢者和肺癌患者血清APEl含量95％可信區(qū)間分別為367n∥mL～1658n∥mL和706n∥mL～2490n∥mL，肺癌患者血清

5、APEl蛋白水平明顯高于健康體檢者(PO05)。3回顧性分析發(fā)現(xiàn)，CEA、CAl25和CA242三項標志物對肺癌診斷的靈敏度和準確率較高。APEl與這三項指標聯(lián)合檢測對肺癌診斷的靈敏度為6857％，特異度為80oo％，準確率為7415％。聯(lián)合APEl檢測較單一標志物檢測的診斷靈敏度和準確率都有所提高，但是同時也降低了診斷的特異度。4建立的間接ELISA在血清稀釋度為1：3200時仍能檢測的到。批內(nèi)變異系數(shù)平均為852％，批間變異系數(shù)平均