EB病毒潛伏膜蛋白1胞外區(qū)融合蛋白的表達及其在血清學(xué)檢測中的應(yīng)用.pdf

1、鼻咽癌(Nasopharyngeal Carcinoma，NPC)是鼻咽上皮來源的惡性腫瘤，在我國南方具有很高的發(fā)病率，對NPC的血清學(xué)和組織活檢及EB病毒(Epstein－Barr Virus,EBV)的基因表達檢測都表明：EB病毒不僅與鼻咽癌的發(fā)病密切相關(guān)，而且對其發(fā)生發(fā)展起重要作用。 EB病毒潛伏膜蛋白1(Latent Membrane Protein 1，LMP－1)能夠在鼻咽癌患者的鼻咽拭子分泌物檢測到。臨床研究中，應(yīng)

2、用PCR技術(shù)檢測鼻咽拭子分泌物診斷鼻咽癌，其靈敏度和特異度分別為94.5％和100％。LMP-1在EBV致瘤機制中發(fā)揮關(guān)鍵性的作用：它能使B淋巴細胞永生化和鼠纖維母細胞的細胞形態(tài)改變；在Rat-1細胞上，LMP-1使其血清依賴性降低、接觸抑制和粘附作用喪失，接種裸鼠內(nèi)可形成腫瘤。LMP-1在鼻咽癌細胞普遍表達，并與鼻咽癌的進展呈正相關(guān)，因此，LMP-1在鼻咽癌的形成中具有重要的生物學(xué)意義。 基于疫苗技術(shù)的發(fā)展，EBV特異性的CD

3、8細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic T lymphocytes,CTL)被認為是治療EBV相關(guān)的鼻咽癌(NPC)和復(fù)發(fā)性霍杰金病(HD)首選方案。EBV表達的LMP-1與LMP-2是僅有的兩種適合于治療性強化NPC和HD患者CTL反應(yīng)的目標抗原。因此，為了增強其抗原性，本研究選用了LMP-1胞外區(qū)作為目的蛋白進行原核表達，為進一步制備LNIP-1抗體制備及研究方法： 1.合成LMP-1胞外區(qū)蛋白核酸序列； 2.用B

4、amH I和EcoR I將含LMP1胞外區(qū)重組基因的質(zhì)粒pMD18-LMP1雙酶切后，將胞外區(qū)片段克隆到pGEX-4T-2中； 3.重組質(zhì)粒經(jīng)酶切鑒定、核酸序列分析后轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL21(DE3)，以異丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)誘導(dǎo)表達融合蛋白； 4.表達的蛋白經(jīng)谷胱甘肽S-轉(zhuǎn)移酶柱親和層析純化； 5.收集鼻咽癌患者的血清； 6.純化的蛋白經(jīng)Western blot法檢測鑒定； 7.E