神經(jīng)管畸形與正常胚胎腦組織miRNAs差異表達分析及其靶mRNA的功能預測.pdf

1、神經(jīng)管畸形（neural tube defects，NTDs）是由于在胚胎發(fā)育過程中，神經(jīng)管閉合不全所引起的一類先天畸形。NTDs屬多因素疾病，該病的發(fā)生主要是遺傳因素和環(huán)境因素及兩者相互作用的結(jié)果。這種畸形起因于神經(jīng)管閉合的失敗，所以影響神經(jīng)管發(fā)育的因素都可能促使其形成。MicroRNAs（miRNAs）是一類長約22個核苷酸的內(nèi)源性單鏈非編碼RNA，通過與靶mRNA完全或不完全互補配對，導致靶mRNA降解或抑制其翻譯，從而在基因的表

2、達調(diào)控中發(fā)揮著重要作用。目前研究表明miRNAs在神經(jīng)干細胞分化和哺乳動物腦發(fā)育過程中起重要作用，提示miRNAS可能參與神經(jīng)管畸形的發(fā)生。但以往研究檢測的miRNA數(shù)量有限，并且國內(nèi)外尚無miRNA在胚胎腦組織中功能研究的報告。因此有必要深入開展miRNA在NTDs胚胎腦組織中的表達和功能研究，為深入了解NTDs的發(fā)病機理提供新的線索。本課題通過對于miRNAS在NTDs與正常胚胎腦組織的差異表達分析和特定miRNAs作用機制的闡釋，

3、有助于我們進一步提高對于NTDs發(fā)生發(fā)展的分子機制的認識。
　　 目的：
　　 建立神經(jīng)管畸形與正常胚胎腦組織miRNAs的差異表達譜，利用生物信息學手段，預測差異表達顯著的miRNAs的靶基因，并進一步分析靶基因的生物學功能及在神經(jīng)管畸形發(fā)生中的作用。為進一步探討miRNAs在神經(jīng)管畸形發(fā)生機制中的作用提供依據(jù)。
　　 方法：
　　 利用miRCURYTM LNA miRNA表達譜芯片分析無腦畸形殘余腦

4、組織和正常胎兒腦組織miRNAs差異表達。利用NCodeTM qRT-PCR kit試劑盒，以U6snRNA作為內(nèi)標，對差異表達顯著的miRNAs進行驗證。利用mirGEN v3數(shù)據(jù)庫預測差異表達顯著的9個miRNAs的靶基因，利用Human Protein Reference Database（HPRD）分析靶蛋白的相互作用，建立相互作用網(wǎng)。利用GeneCodis2.0分析相互
　　 結(jié)果：
　　 1.miRNA芯片檢

5、測發(fā)現(xiàn)：實驗組與對照相比，有213個miRNAs表達差異顯著（兩組差異>2倍）。miRNAs表達上調(diào)2倍以上116個（其中包含miRPLUS9個），miRNAs表達下調(diào)2倍以上97個（其中包含miRPLUS2個）。
　　 2.依據(jù)表達差異顯著性和在腦組織中表達的特異性，選擇9個miRNAs進行real-time RT-PCR驗證。miR-9、miR-212、miR-451、miR-198、miR-126、miR-124和miR-

6、138檢測結(jié)果與miRNA芯片一致，miR-103/miR-107與miRNA芯片結(jié)果相反。表達上調(diào)：miR-451、miR-198和miR-126，表達下調(diào)：miR-9、miR-212、miR-103、miR-107、miR-124和miR-138。這9個miRNAs在NTDs和正常對照中的表達差異均具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。
　　 3.經(jīng)過mirGEN v3數(shù)據(jù)庫分析，881個基因被預測為這9個miRNAs的靶基因。其

7、中79個基因包含在蛋白質(zhì)相互作用網(wǎng)中。
　　 4.經(jīng)GeneCodis2.0分析，這些蛋白參與基因轉(zhuǎn)錄、信號轉(zhuǎn)導、細胞周期、細胞生長、死亡和細胞間信號轉(zhuǎn)導這些重要的生物學過程；發(fā)揮蛋白結(jié)合、轉(zhuǎn)錄因子活化、受體結(jié)合及活化、核酸結(jié)合、DNA結(jié)合和轉(zhuǎn)移酶活化等生物學功能；并且它們涉及肌動蛋白、Jak-STAT和MAPK等與神經(jīng)發(fā)育相關的信號通路。
　　 結(jié)論：
　　 miRNAs在無腦畸形和正常對照胎兒腦組織中表達譜存