細(xì)胞凋亡在神經(jīng)管畸形發(fā)生中作用的初步研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、目的:
   應(yīng)用全反式維甲酸(All-trans retinoic acid,ATRA)誘導(dǎo)建立C57BL/6J小鼠神經(jīng)管畸形(Neural tube defects,NTDs)動(dòng)物模型,研究凋亡在神經(jīng)管發(fā)育過程中的作用及其對(duì)NTDs發(fā)生發(fā)展的影響,探討凋亡在ATRA致NTDs中可能的作用機(jī)制。
   方法:
   選取健康成年C57BL/6J小鼠,在懷孕至第8天以28mg/kg一次性灌胃大劑量ATRA誘導(dǎo)建立

2、NTDs動(dòng)物模型,MoticK系列體視顯微鏡下觀察胎鼠畸形情況;HE染色,OlympusSZX-1LLB200顯微鏡下拍照觀察胚胎神經(jīng)管橫斷面形態(tài)學(xué)改變;TUNEL(TdT-mediatex-dUTP Nick End Labeling,TUNEL)技術(shù),檢測(cè)E11.5d時(shí)NTDs實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組凋亡情況;Image-pro plus軟件對(duì)所取圖像進(jìn)行圖像分析、測(cè)定陽(yáng)性染色平均光密度(mean opticaldensity,MOD)及陽(yáng)性

3、染色面積率,計(jì)算細(xì)胞凋亡指數(shù)(apoptosis index,AI);免疫組化檢測(cè)caspase-3、-6、-9表達(dá),對(duì)照組與NTDs實(shí)驗(yàn)組數(shù)據(jù)的處理采用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析和t檢驗(yàn),并對(duì)其進(jìn)行綜合分析。
   結(jié)果:
   1.過量ATRA具有明顯的胚胎致畸性,可致孕鼠子宮明顯充血淤血,造成無(wú)腦、脊柱裂等NTDs形態(tài)表現(xiàn)。
   2.TUNEL陽(yáng)性信號(hào)為綠色熒光,對(duì)照組組織細(xì)胞只有少量凋亡

4、細(xì)胞,而NTDs實(shí)驗(yàn)組組織細(xì)胞濃度減少,凋亡細(xì)胞明顯增多。
   3. NTDs實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組神經(jīng)細(xì)胞凋亡caspase-3、-6、-9蛋白表達(dá)量存在明顯差異。
   結(jié)論:
   1.應(yīng)用ATRA成功誘導(dǎo)建立C57BL/6J小鼠神經(jīng)管畸形動(dòng)物模型,為研究NTDs發(fā)病機(jī)制奠定了重要模型基礎(chǔ)。
   2.凋亡在神經(jīng)管閉合中發(fā)揮一定作用,可能由于過度凋亡導(dǎo)致參與關(guān)鍵形態(tài)部位形成的細(xì)胞數(shù)量不足,而使神經(jīng)管閉合不

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