肺肉瘤樣癌中血管生成擬態(tài)的形成及其與上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的關(guān)系.pdf

1、目的：
　　 研究肺肉瘤樣癌(pulmonary sarcomatoid carcinoma，PSC)中血管生成擬態(tài)(vasculogenic mimicry，VM)的臨床意義，闡述上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-to-mesenchymal transition，EMT)提高肺肉瘤樣癌的惡性度及促進(jìn)VM形成的相關(guān)機(jī)制。
　　 方法：
　　 回顧性分析天津醫(yī)科大學(xué)附屬腫瘤醫(yī)院1995年1月至2007年12月

2、術(shù)前未經(jīng)過放化療的肺肉瘤樣癌患者22例及肺鱗癌患者79例的臨床資料，總結(jié)其臨床病理特征及隨訪結(jié)果。對(duì)實(shí)驗(yàn)組肺肉瘤樣癌組織切片22例和對(duì)照組肺鱗癌79例的組織切片進(jìn)行HE、CD31和PAS雙重染色，對(duì)EMT相關(guān)指標(biāo)Twist1、Vimentin、E-cadherin進(jìn)行免疫組化染色。利用免疫組化指標(biāo)CK5/6，CK8/18，p63確定實(shí)驗(yàn)組22例肺肉瘤樣癌的組織起源，并且對(duì)實(shí)驗(yàn)組22例組織切片進(jìn)行VE-cadherin、EphA2、MMP

3、2、VEGF、Hif-1α免疫組化染色，分析肺肉瘤樣癌中VM的臨床意義及EMT促進(jìn)VM形成的相關(guān)機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 1.肺肉瘤樣癌的組織起源
　　 在22例肉瘤樣癌中腫瘤細(xì)胞含上皮細(xì)胞成分者18例CK5/6或p63陽性，2例CK8/18例陽性，2例p63和CK8/18在不同區(qū)域陽性，9例波形蛋白陽性;22例肉瘤樣癌中腫瘤細(xì)胞含梭形細(xì)胞成分者17例CK5/6或p63陽性，1例CK8/18例陽性，22例波形蛋

4、白陽性。大部分肉瘤樣細(xì)胞表達(dá)鱗癌標(biāo)記物。
　　 2.兩組中腫瘤EMT相關(guān)指標(biāo)表達(dá)
　　 在肺肉瘤樣癌組織中，Twist1、E-cadherin、Vimentin的陽性率分別為50％，36.4％，90.9％;對(duì)照組肺鱗癌組織中的陽性率分別為35.6％，75.9％，20.3％。各指標(biāo)在兩組間比較有明顯差異性(P=0.000，P=0.000，P=0.037)。由此可以得出轉(zhuǎn)錄因子Twist1與EMT標(biāo)記蛋白的表達(dá)關(guān)系密切，與對(duì)

5、照組相比，肺肉瘤樣癌中Twist1和Vimentin蛋白表達(dá)增高，E-cadherin蛋白表達(dá)降低。
　　 3.VM、Twist1與臨床病理資料之間的聯(lián)系
　　 肺肉瘤樣癌和肺鱗癌中都存在VM，Kaplan-Meier生存分析結(jié)果顯示VM陽性患者生存時(shí)間比VM陰性患者生存時(shí)間短。Log-rank檢驗(yàn)法比較生存曲線的差別，肺肉瘤樣癌中x2=4.544，P=0.033，肺鱗癌中x2=5.846，P=0.016差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義

6、。不同性別、年齡、腫瘤大小、有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、是否復(fù)發(fā)、患者的VM陽性情況比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(依次為P=0.622、P=0.226、P=0.368、P=0.073、P=0.818)，TNM不同分期、有無血道轉(zhuǎn)移患者VM陽性情況差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（分別為P=0.026、P=0.029）。不同性別、年齡、腫瘤大小、血道轉(zhuǎn)移、是否復(fù)發(fā)、TNM分期患者的Twist1蛋白陽性表達(dá)差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（依次為P=0.330、P=0.500、P=0.5

7、00、P=0.238、P=0.500、P=0.528），有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者的Twist1蛋白陽性表達(dá)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.040)。肺鱗癌中有4例存在VM(5.1％)，與肺肉瘤樣癌(18.2％)相比兩者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(x2=4.06，P=0.044)。
　　 4.肺肉瘤樣癌中VM陽性組與陰性組Twist1、VM相關(guān)蛋白的表達(dá)情況
　　 檢測(cè)肺肉瘤樣癌中VM陽性組與陰性組中Twist1、VM相關(guān)蛋白VE-cadher

8、in、EphA2、MMP-2、VEGF、Hif-1α的差異性表達(dá)。VM陽性組中各指標(biāo)的陽性率分別為(4/4，100％;4/4，100％;4/4，100％;3/4，75％;3/4，75％;0/4，0％)。VM陰性組中各指標(biāo)的陽性率分別為(7/18，38.9％;6/18，33.3％;7/18，38.9％;3/18,16.7％;10/18,55.6％;2/18,11.1％)。 Twist1, VE-cadherin, EphA2,和MMP-2

9、蛋白的表達(dá)在VM陽性組和VM陰性組間有顯著差異(P=0.045，P=0.029，P=0.045，P=0.046)。而VEGF和Hif-1α蛋白的表達(dá)在VM陽性組和VM陰性組間無明顯差異(P=0.616，P=0.662)。
　　 5.Twist1的表達(dá)與VM形成相關(guān)蛋白的相關(guān)性
　　 在肺肉瘤樣癌中，Twist1、血管生成擬態(tài)相關(guān)蛋白VE-cadherin，EphA2，MMP-2的陽性率分別為(11/22，50％)、(10

10、/22，45.5％)、(11/22，50％)、(6/22，27.3％)。Twist1的表達(dá)與VE-cadherin，EphA2，MMP-2的高表達(dá)呈正相關(guān)(Spearman秩相關(guān)檢驗(yàn):rs=0.638，P＜0.05;rs=0.694;P＜0.05;rs=0.669，P＜0.05)。VE-cadherin的表達(dá)與EphA2的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.470，P＜0.05)。EphA2的表達(dá)與MMP-2的表達(dá)呈正相關(guān)(rs=0.548，P＜0

11、.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.本實(shí)驗(yàn)中22例肺肉瘤樣癌的上皮樣成分多數(shù)為鱗癌，且大部分肉瘤樣細(xì)胞表達(dá)鱗癌標(biāo)記物。說明肉瘤樣癌可能是由肺鱗癌轉(zhuǎn)化而來。EMT在其中發(fā)揮了重要作用。Twist1作為上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)變過程中的關(guān)鍵調(diào)控因子，通過正向調(diào)節(jié)Vimentin的表達(dá)，負(fù)向調(diào)節(jié)E-cadherin的表達(dá)，從而誘導(dǎo)了EMT的發(fā)生。
　　 2.EMT是胚胎發(fā)育的重要環(huán)節(jié)，而VM的管道形成模式與原始的胚胎血管相似，我們推

12、測(cè)兩者之間關(guān)系密切。本研究通過應(yīng)用HE，CD31和PAS雙重染色證實(shí)VM存在于肺肉瘤樣癌和肺鱗癌中，生存分析顯示VM陽性患者生存時(shí)間比VM陰性患者生存時(shí)間短。VM的存在與血道轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，VM是預(yù)后不良的指標(biāo)，由于發(fā)生了EMT，肺肉瘤樣癌獲得了更高的惡性度，VM在肺肉瘤樣癌組中的陽性率明顯高于肺鱗癌組。在肺肉瘤樣癌中，轉(zhuǎn)錄因子Twist1的高表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)。EMT在腫瘤的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮重要作用，Twist1可能通過誘導(dǎo)EMT的

13、發(fā)生促進(jìn)了腫瘤細(xì)胞的轉(zhuǎn)移。
　　 3.在肉瘤樣癌中，VM的形成機(jī)制與VE-cadherin，EphA2，MMP-2蛋白的高表達(dá)密切相關(guān)。VE-cadherin/EphA2/PI3 K/MMP可能是VM形成的關(guān)鍵通路。而肺肉瘤樣癌中VM的形成又與Twist1密切相關(guān)。提示轉(zhuǎn)錄因子Twist1可能通過誘導(dǎo)EMT從而促進(jìn)VM的形成。進(jìn)一步檢測(cè)發(fā)現(xiàn)Twist1的表達(dá)與VE-cadherin、EphA2、MMP-2蛋白的高表達(dá)呈正相關(guān)，提