上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化在銀屑病中的研究.pdf

1、上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(EMT)是一種胚胎時(shí)期出現(xiàn)過的一個(gè)基本過程，同時(shí)也是傷口愈合、器官纖維化以及惡性上皮腫瘤發(fā)生的基礎(chǔ)。研究EMT對(duì)于認(rèn)識(shí)和理解炎癥性疾病發(fā)生、發(fā)展的病理生理機(jī)制都有十分重要的意義。銀屑病是以表皮過度增殖、血管內(nèi)皮異常增生和淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)為特征的慢性炎癥性皮膚病。表皮角質(zhì)形成細(xì)胞在增殖和遷移中表型轉(zhuǎn)變，其抗凋亡、遷移能力顯著提升，這個(gè)過程類似于上皮-間充質(zhì)轉(zhuǎn)化的過程，為了進(jìn)一步證實(shí)猜想，我們開展了這個(gè)課題的研究。
　　

2、目的：
　　明確EMT相關(guān)分子標(biāo)志物在皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞及皮膚組織中的定位;明確EMT相關(guān)分子標(biāo)志物在正常皮膚組織及體外培養(yǎng)角質(zhì)形成細(xì)胞中的表達(dá)量;闡明EMT相關(guān)分子標(biāo)志物在銀屑病中表達(dá)的相關(guān)調(diào)控因素;EMT相關(guān)分子標(biāo)志物在銀屑病發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。
　　方法：
　　獲取來(lái)自銀屑病病人皮膚樣本，并進(jìn)行角質(zhì)形成細(xì)胞原代培養(yǎng)。免疫熒光及免疫組化法研究EMT相關(guān)分子標(biāo)志物在銀屑病皮膚組織及細(xì)胞的定位。提取組織及細(xì)胞的RNA和

3、蛋白質(zhì)，進(jìn)行定量PCR、免疫印跡實(shí)驗(yàn)，分析EMT相關(guān)分子標(biāo)志物的表達(dá)量。經(jīng)銀屑病相關(guān)細(xì)胞因子處理，進(jìn)一步觀察EMT相關(guān)分子標(biāo)志物不同細(xì)胞因子處理下在銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中的表達(dá)差異。經(jīng)ERK、Rho和GSK3的抑制劑分別處理以及與地塞米松聯(lián)合處理，以此觀察EMT相關(guān)分子標(biāo)志物在銀屑病發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制。
　　結(jié)果：
　　正常皮膚及銀屑病皮膚樣本中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子標(biāo)志物的表達(dá)
　　1.上皮細(xì)胞分子標(biāo)記物E-cad和β-c

4、atenin在正常表皮和銀屑病表皮全層中均有表達(dá);K10和K16定位于表皮層棘層以上，正常和銀屑病表皮中定位無(wú)明顯差異。K14在正常表皮中定位于基底及基底上層，而在銀屑病表皮中則定位于表皮全層。
　　2.在正常和銀屑病真皮中均沒有上皮分子標(biāo)志物E-cad，K10，K14和K16的表達(dá)。
　　3.在正常表皮中沒有間質(zhì)分子標(biāo)志物Vim，Snail，Slug，F(xiàn)N和N-cad的表達(dá)。
　　4.在銀屑病表皮中，間質(zhì)細(xì)胞分子標(biāo)志

5、物Vim，Snail，Slug和FN大量表達(dá)，N-cad中等量表達(dá)。
　　1.體外培養(yǎng)正常和銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子標(biāo)志物RNA和蛋白水平
　　1.與正常角質(zhì)形成細(xì)胞相比，銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子標(biāo)志物轉(zhuǎn)錄組測(cè)序水平為K10下調(diào)，Vim，F(xiàn)N，PAI-1和Snail RNA水平上調(diào)，E-cad，K14，K16，N-cad，β-catenin和Slug沒有明顯差異。
　　2.正常和銀屑病角質(zhì)形成細(xì)

6、胞中，Vim，F(xiàn)N和PAI-1 mRNA水平有顯著差異(P＜0.01)，而E-cad，K10，K14，K16，N-cad，β-catenin，Snail和Slug mRNA水平無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　3.正常和銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中，Vim，F(xiàn)N和PAI-1蛋白水平有顯著差異。
　　2.銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞中上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化分子標(biāo)志物的調(diào)控機(jī)制
　　1.上皮分子標(biāo)志物E-cad在TNF-α作用下表達(dá)略微升高，K10在IL-8，TG

7、F-β1，IL-13，尤其是IL-17A和TNF-α的作用下表達(dá)顯著下調(diào)。K14在IL-17A的作用下表達(dá)降低而TGF-β1對(duì)其作用相反，TGF-β1也使N-cad表達(dá)顯著上調(diào)。
　　2.IL-17A和IL-13下調(diào)間質(zhì)分子標(biāo)志物Vim和FN mRNA水平，而TGF-β1則作用相反。
　　3.TNF-a上調(diào)FN而下調(diào)Slug的表達(dá)，TGF-γ1上調(diào)PAI-1，Snail在IL-17A作用下表達(dá)上調(diào)，而IL-8則促其下調(diào)。

8、r>　　4.MAPK/ERK、Rho/ROCK和Wnt/GSK3信號(hào)通路在銀屑病角質(zhì)形成細(xì)胞EMT的作用
　　1.Y27632阻斷Rho，或SB216763阻斷GSK3后均能引起E-cad，β-catenin和Slug RNA和蛋白水平的升高。
　　2.單獨(dú)使用地塞米松在0.2μM濃度時(shí)可使Slug下調(diào)而對(duì)E-cad和β-catenin無(wú)影響，在2μM濃度時(shí)引起E-cad表達(dá)升高和Slug的表達(dá)降低。
　　3.地塞米松

9、在0.2μM的濃度與Y27632共孵育時(shí)能明顯抑制Y27632所引起的E-cad,β-catenin和Slug表達(dá)上調(diào)，但在其2μM濃度時(shí)只影響Y27632對(duì)β-catenin的影響。
　　4.SB216763介導(dǎo)的E-cad過表達(dá)在地塞米松0.2μM和2μM濃度時(shí)均被抑制，而對(duì)β-catenin和Slug的影響則只有在地塞米松2μM濃度時(shí)則被抑制。
　　結(jié)論：
　　1.表皮角質(zhì)形成細(xì)胞的特征是上調(diào)間充質(zhì)分子標(biāo)志物Vi