銀屑病皮損間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性及其對(duì)HaCaT細(xì)胞凋亡影響的研究.pdf

1、目的：
　　在體外分離、培養(yǎng)及鑒定銀屑病患者皮損和正常人皮膚來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞( Mesenchymal stem cells，MSCs)，通過(guò)研究銀屑病患者皮損和正常人皮膚MSCs對(duì)HaCaT細(xì)胞凋亡的影響，進(jìn)一步明確銀屑病患者皮損MSCs對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞（Keratinocyte，KC）凋亡的作用，從而為銀屑病患者皮損KC的異常凋亡提供理論基礎(chǔ)，進(jìn)一步揭示銀屑病可能的發(fā)病機(jī)制。
　　方法：
　　1.分別取自我院整形科

2、和泌尿外科手術(shù)切除的多余的新鮮皮膚組織和皮膚科門(mén)診臨床上已確診的銀屑病患者的皮損組織各8份，在體外無(wú)菌條件下進(jìn)行真、表皮分離，培養(yǎng)真皮MSCs；2.采用流式細(xì)胞術(shù)對(duì)細(xì)胞表面抗原CD29、CD34、CD44、CD45、CD73、CD90、CD105、HLA-DR進(jìn)行檢測(cè)；3.多向誘導(dǎo)分化及分化細(xì)胞的鑒定；4.將銀屑病患者組皮損及正常對(duì)照組皮膚的第5代MSCs分別與HaCaT細(xì)胞共培養(yǎng)，并設(shè)對(duì)照進(jìn)行HaCaT細(xì)胞單獨(dú)培養(yǎng)，采用實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)細(xì)胞分

3、析法檢測(cè)HaCaT細(xì)胞的增殖曲線；5.三組細(xì)胞培養(yǎng)72 h后，在流式細(xì)胞儀上利用Annexin-V/PI試劑盒分別檢測(cè)三組HaCaT細(xì)胞的凋亡率；6.銀屑病患者組皮損及正常對(duì)照組皮膚MSCs對(duì)HaCaT細(xì)胞凋亡率的影響采用方差分析及SNK檢測(cè)；7.銀屑病患者組HaCaT細(xì)胞的凋亡率與本病的皮損面積及嚴(yán)重程度評(píng)分兩者之間的相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析。
　　結(jié)果：
　　1.在倒置相差顯微鏡下觀察銀屑病患者組皮損和正常對(duì)

4、照組皮膚MSCs的細(xì)胞形態(tài)相似，呈細(xì)長(zhǎng)梭形；2.采用流式細(xì)胞儀檢測(cè)MSCs表面抗原，結(jié)果顯示細(xì)胞表面抗原CD29、CD44、CD73、CD90、CD105呈高表達(dá)，而CD34、CD45及HLA-DR呈陰性表達(dá)；3.用脂肪細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成軟骨細(xì)胞三種不同的誘導(dǎo)體系可將MSCs誘導(dǎo)分化為三種相應(yīng)的細(xì)胞；4.實(shí)時(shí)動(dòng)態(tài)細(xì)胞分析法檢測(cè)3組HaCaT細(xì)胞的增殖曲線在32~60h后開(kāi)始出現(xiàn)不同程度的凋亡；5.共培養(yǎng)結(jié)果為：銀屑病患者組HaCaT細(xì)胞

5、凋亡率為（37.19?15.35）％，正常對(duì)照組HaCaT細(xì)胞凋亡率為（75.44?9.08）%，顯示了銀屑病患者組皮損及正常對(duì)照組皮膚MSCs均具有誘導(dǎo)或者抑制HaCaT細(xì)胞凋亡的能力（p<0.05）；6.兩組相比，銀屑病患者組皮損MSCs誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞凋亡的能力減弱或抑制HaCaT細(xì)胞凋亡的能力增加（p<0.05）；7.銀屑病患者組HaCaT細(xì)胞凋亡率與本病的皮損面積及嚴(yán)重程度評(píng)分兩者之間無(wú)相關(guān)性（p>0.05）。
　　結(jié)

6、論：
　　1.成功的在體外分離、培養(yǎng)及鑒定了銀屑病患者皮損及正常人皮膚MSCs，進(jìn)一步加強(qiáng)了培養(yǎng)MSCs方法的可靠性及有效性；2.銀屑病患者皮損及正常人皮膚MSCs均具有誘導(dǎo)或者抑制HaCaT細(xì)胞凋亡的能力；3.銀屑病患者皮損MSCs誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞凋亡的能力與正常人皮膚MSCs相比明顯減弱或者抑制HaCaT細(xì)胞凋亡的能力與正常人皮膚MSCs相比明顯增加，表明銀屑病患者皮損MSCs可能誘導(dǎo)HaCaT細(xì)胞凋亡的能力減弱或者抑制Ha