SNAP-29分子在胞吐中的功能研究.pdf

1、該項研究采用國外新近建立的一種對可能調(diào)控神經(jīng)遞質(zhì)釋放的蛋白分子進行功能研究的實驗方法一PCl2細胞分泌分析系統(tǒng)對SNAP- 29分子在胞吐中可能起的調(diào)節(jié)功能做進一步的研究.該系統(tǒng)可以研究各種蛋白在胞吐(exocytosis)過程中的作用.該方法是將編碼hGH(人生長激素)的質(zhì)粒和編碼所感興趣蛋白的質(zhì)粒瞬時共轉(zhuǎn)染PC12細胞,在轉(zhuǎn)染后細胞中,hGH可作為胞吐的一個報告物,當PC12細胞受到刺激后,hGH會分泌出來,感興趣蛋白對hGH分泌的

2、影響反映了它對胞吐過程起的作用.該項研究首先對PC12細胞的轉(zhuǎn)染條件進行了優(yōu)化,分別觀察了細胞鋪板密度、DNA 數(shù)量、DNA與脂質(zhì)體的比例對轉(zhuǎn)染效率的影響.同時采用表達綠色熒光蛋白的商品化質(zhì)粒載體pEGFP-N3轉(zhuǎn)染PCl2細胞,利用綠色熒光蛋白作為報s告物來檢測PCI2細胞的轉(zhuǎn)染效率,確立了最佳轉(zhuǎn)染條件:6孔板每孔種1.5×10<'6>個PC12細胞,DNA總量為4.5ug,DNA與陽離子脂質(zhì)體Lipofectamine<'TM>20