CD24分子在刀豆蛋白A誘導(dǎo)小鼠急性肝損傷中的作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的:急性肝損傷(Acute liver injury)是臨床較為常見(jiàn)、嚴(yán)重影響人類健康的全球危害性疾病。外界有毒物質(zhì)、病原微生物以及藥物等均可能造成急性肝損傷，該疾病表現(xiàn)為:短時(shí)間內(nèi)肝細(xì)胞出現(xiàn)壞死、出血，血清谷丙/草轉(zhuǎn)氨酶及細(xì)胞因子急劇升高，累積多臟器功能障礙，嚴(yán)重至肝功能衰竭。目前對(duì)于急性肝損傷的機(jī)制仍然不明確。越來(lái)越多的證據(jù)表明肝臟由于其雙重血供，該器官其實(shí)也是一個(gè)特殊的免疫耐受微環(huán)境。研究表明導(dǎo)致肝損傷的原因并非是外界物質(zhì)的直接

2、作用，而是表達(dá)在受感染的肝臟細(xì)胞表面針對(duì)抗原所產(chǎn)生的免疫應(yīng)答導(dǎo)致嚴(yán)重的免疫失衡，繼而產(chǎn)生大量的炎癥因子致使肝損傷發(fā)生直至嚴(yán)重的多器官功能障礙。CD24是一種人和鼠中多種細(xì)胞表面表達(dá)的、具有多種不同生物學(xué)功能的低分子量的細(xì)胞表面膜蛋白。CD24分子被證實(shí)調(diào)控了自身反應(yīng)性T細(xì)胞和抑制抗原遞呈及T細(xì)胞活化作用。刀豆蛋白A誘導(dǎo)的肝損傷模型較為真實(shí)的模擬急性免疫性肝損傷的體內(nèi)過(guò)程。然而CD24分子在刀豆蛋白A誘導(dǎo)的急性肝損傷中的作用尚未報(bào)道。

3、r>　　本論文的主要研究?jī)?nèi)容概括如下:一、CD24缺陷小鼠與同窩野生型小鼠在刀豆蛋白A誘導(dǎo)的急性肝損傷模型中肝損傷程度（包括肝臟病理、血清ALT水平和細(xì)胞因子表達(dá)水平）的差別。二、研究造成差別的免疫機(jī)制（包括肝臟細(xì)胞亞群和相關(guān)細(xì)胞信號(hào)通路）。
　　方法:通過(guò)尾靜脈注射刀豆蛋白A建立小鼠急性肝損傷模型，比較CD24缺陷小鼠及同窩野生型小鼠在刀豆蛋白A誘導(dǎo)的急性肝損傷程度（包括肝臟病理、血清ALT水平和細(xì)胞因子表達(dá)水平）的差異。檢測(cè)肝

4、臟及脾臟中CD4+T及CD8+T細(xì)胞表面CD24表達(dá)的表達(dá)水平。檢測(cè)CD24缺陷小鼠和對(duì)照組小鼠T細(xì)胞的成熟情況。確認(rèn)CD24缺陷小鼠導(dǎo)致急性肝損傷差異的細(xì)胞來(lái)源(胞內(nèi)染色確定CD4+、CD8+T和NKT細(xì)胞釋放IFN-γ)。再通過(guò)過(guò)繼轉(zhuǎn)輸實(shí)驗(yàn)體內(nèi)確定急性肝損傷差異的免疫細(xì)胞來(lái)源。通過(guò)刀豆蛋白A、抗CD3/CD28抗體及PMA/Ionomycin體外刺激CD24缺陷小鼠及對(duì)照小鼠T細(xì)胞，確認(rèn)產(chǎn)生IFN-γ差異的T細(xì)胞。通過(guò)Western

5、 blot方法分析CD24缺陷小鼠及對(duì)照小鼠在刀豆蛋白A作用后，肝臟及脾臟T細(xì)胞相關(guān)信號(hào)通路的差異，尋找相關(guān)的信號(hào)分子。
　　結(jié)果:(1)刀豆蛋白A刺激后使T細(xì)胞上CD24分子表達(dá)明顯上調(diào);(2)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明刀豆蛋白A對(duì)CD24缺陷小鼠所造成的肝損傷程度明顯低于野生型小鼠;(3)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)和體外實(shí)驗(yàn)均證實(shí)，在刀豆蛋白A造成肝損傷情況下，CD24缺陷的CD4+T細(xì)胞所分泌的IFN-γ較少;(4)在刀豆蛋白A誘導(dǎo)的肝損傷后，CD24缺陷