紅皮云杉體細(xì)胞胚形成及不定芽誘導(dǎo).pdf

1、紅皮云杉材質(zhì)優(yōu)良、干形通直、生長(zhǎng)較快、適應(yīng)性強(qiáng)、是營(yíng)造用材林、防護(hù)林及庭院綠化的優(yōu)良樹(shù)種，具有較高的經(jīng)濟(jì)、生態(tài)和美學(xué)價(jià)值。近年來(lái)，我國(guó)東北林區(qū)大力發(fā)展和營(yíng)造紅皮云杉人工林，大興安嶺林區(qū)紅皮云杉每年造林占總面積的5％，十年后將上升到20％左右，其造林面積將超過(guò)落葉松，是一個(gè)具有廣闊前途的優(yōu)良樹(shù)種。但紅皮云杉天然林現(xiàn)在只是呈小塊狀的零星分布的狀態(tài)而且還有進(jìn)一步萎縮的趨勢(shì)，一些優(yōu)質(zhì)的種質(zhì)資源損失嚴(yán)重，優(yōu)質(zhì)種子園建設(shè)還沒(méi)有形成生產(chǎn)力，優(yōu)良無(wú)性系

2、選造規(guī)模較小，現(xiàn)營(yíng)造的人工林多為未經(jīng)過(guò)測(cè)定的天然林、人工林中采收種子后繁育的種苗。優(yōu)良種質(zhì)資源的保護(hù)、保存、繁育工作較為滯后。大大落后于西方發(fā)達(dá)國(guó)家的同類(lèi)樹(shù)種如歐洲云杉、黑云杉、白云杉等的研究水平，也比國(guó)內(nèi)其他樹(shù)種晚得多。因此對(duì)紅皮云杉體細(xì)胚形成和不定芽誘導(dǎo)顯得急為迫切，它不僅可以解決優(yōu)良苗木繁育和種質(zhì)資源保存等問(wèn)題，而且也可以為基因工程技術(shù)研究等打下基礎(chǔ)。我們對(duì)紅皮云體細(xì)胞胚形成和不定芽誘導(dǎo)技術(shù)進(jìn)行研究的結(jié)果如下：
　　以紅皮云

3、杉的7月20日采集的未成熟全胚作為外植體，在暗培養(yǎng)、22℃條件下，在附加0.46mg·L-1BA、0.53 mg·L-1KT、3.07 mg·L-1NAA、20g·L-1蔗糖，450mg·L-1 L-谷氨酰胺、750mg·L-1水解酪蛋白、2 g·L-1凝膠(Gelrite)的改良RJW基本培養(yǎng)基上可獲得最好的胚性愈傷組織誘導(dǎo)效果，平均誘導(dǎo)率可達(dá)81.27％。遺傳基礎(chǔ)對(duì)胚性愈傷組織誘導(dǎo)影響顯著。紅皮云杉在保持增殖階段在附加5g·L-1肌

4、醇、0.21mg·L-1BA、0.20 mg·L-1KT、1.85mg·L-1NAA的改良RJW基本培養(yǎng)基上，以固體/濾紙交替培養(yǎng)的方式增殖率、增殖量最高，胚性愈傷組誘導(dǎo)率與增殖率和增殖量之間存在強(qiáng)烈的正相關(guān)。隨著繼代次數(shù)增加增殖率和增殖量逐漸下降，不同的細(xì)胞系下降的速率不相同。在球狀胚誘導(dǎo)階段以不加任何激素的改良RJW附加15 g·L-1肌醇和3g·L-1的活性碳對(duì)球狀胚誘導(dǎo)效果最好為97.6個(gè)/g。遺傳基礎(chǔ)不同的三個(gè)細(xì)胞系對(duì)中等濃度

5、的肌醇和活性碳的反應(yīng)是一致的。在紅皮云杉體細(xì)胞胚成熟的培養(yǎng)階段以改良的RJW基本培養(yǎng)基附加7.5mg·L-1ABA、40g·L-1蔗糖、20g·L-1PEG4000、1.76mg·L-1維生素C。在此培養(yǎng)基上3#、2#和9#細(xì)胞系的成熟率分別達(dá)到45、65和15個(gè)/g，平均為41.7個(gè)/g。AgNO3不僅沒(méi)有促進(jìn)紅皮云體細(xì)胞胚的有效分劃，而且還起到了抑制作用。在體胚萌發(fā)轉(zhuǎn)換階段以改良1/2RJW培養(yǎng)基附加3g·L-1活性碳的萌發(fā)率最高，

6、最高的萌發(fā)率為88.5％。轉(zhuǎn)換培養(yǎng)基以1/2BMI為最適宜，干燥期為8天時(shí)轉(zhuǎn)換效果最好，平均轉(zhuǎn)換率達(dá)18.0％。
　　在紅皮云不定芽誘導(dǎo)技術(shù)研究過(guò)程中以8月3日采集的未成熟胚在附加0.2 mg·L-1BA、0.4 mg·L-12，4-D的SH培養(yǎng)基上，在光照、22℃條件下，不定芽愈傷組織誘率最高。在誘導(dǎo)不定芽分化階段以附加0.2 mg·L-1BA、0.2 mg·L-12，4-D的SH培養(yǎng)基，無(wú)論在不定芽分化頻率還是不定芽個(gè)數(shù)都是最