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文檔簡介
1、致病菌污染食品可導(dǎo)致多種疾病的暴發(fā)與流行,嚴(yán)重威脅人類的健康。因此,若想有效控制食品細(xì)菌性疾病的發(fā)生,快速而準(zhǔn)確地檢測食品中致病菌是關(guān)鍵的技術(shù)基礎(chǔ)之一。傳統(tǒng)的細(xì)菌培養(yǎng)方法及生化鑒定,操作繁瑣,且需要數(shù)天才能得到結(jié)果。免疫學(xué)方法和探針雜交技術(shù)也存在特異性或敏感性的問題。常規(guī)PCR一次只能檢出一種致病菌,對食品中分離的未知菌,或有多種細(xì)菌污染的樣品則顯得無從下手。為了實現(xiàn)對食品中致病菌的快速檢測與鑒定,預(yù)防腸道細(xì)菌性疾病的發(fā)生,我們運用寡核
2、苷酸芯片技術(shù)建立了對常見食源性致病菌進(jìn)行檢測的方法,檢測的目的菌株是霍亂弧菌、腸出血性大腸桿菌O157:H7、副溶血性弧菌、耶爾森氏菌、單增李氏菌、富氏志賀氏菌、鼠傷寒沙門氏菌、空腸彎曲菌、金黃色葡萄球菌。我們利用在細(xì)菌分類學(xué)上具有重要意義的16SrRNA和23SrRNA基因作為檢測的靶分子,并在其間設(shè)計探針,建立一套食品致病菌的基因芯片快速檢測技術(shù)。不同細(xì)菌的16SrRNA和23SrRNA基因具有序列一致的恒定區(qū)和序列不同的可變區(qū),恒
3、定區(qū)和可變區(qū)交錯排列。這樣,我們在恒定區(qū)設(shè)計PCR引物,在可變區(qū)設(shè)計檢測探針;用四對引物在同一反應(yīng)條件下就可以將全部九種致病菌的相應(yīng)基因片段擴(kuò)增出來,再用每種細(xì)菌的特異性探針陣列與標(biāo)記的靶片段進(jìn)行雜交反應(yīng),雜交后用專用設(shè)備讀取分析熒光信號,可以定性和半定量地檢出致病菌。通過雜交結(jié)果可以看出設(shè)計的探針特異性強,并且相對于傳統(tǒng)的方法操作簡單、用時少,穩(wěn)定性、重復(fù)性都非常好,靈敏度可達(dá)到1.6×103cfu/mL,另外,我們還對單獨DNA模板
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