人卵巢癌候選相關(guān)基因HE4（WFDC2）轉(zhuǎn)錄調(diào)控機制的研究.pdf

1、HE4(human epididymis gene product 4,又名WFDC2,WAP four-disulfide core protein2)基因在卵巢癌組織中高表達,但是在正常組織包括卵巢組織中不表達或低表達.因此該基因可能是一個卵巢癌相關(guān)基因,該基因的啟動子可能是一個卵巢癌特異性的啟動子.篩選腫瘤特異性的啟動子是腫瘤基因治療中解決治療基因靶向性表達問題的關(guān)鍵.在HE4基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究過程中,我們發(fā)現(xiàn):1,HE4基因的表

2、達并不是卵巢癌特異性的,除了在卵巢癌細胞株SKOV3中高表達外,在子宮頸癌細胞株C33A,肝癌細胞株HepG2以及人胚腎細胞株293中也存在高表達.而在另一些細胞株如肺癌細胞株A549,SPC-A1及肝癌細胞株SMMC-7721,BEL7402中則低表達或不表達.2,引物延伸法確定了HE4基因的轉(zhuǎn)錄起始點位于翻譯起始點(ATG)上游-27位.3,對HE4基因啟動子的系統(tǒng)缺失分析發(fā)現(xiàn)從轉(zhuǎn)錄起始點上游-107bp到下游+29bp是該基因的最

3、小啟動子的區(qū)域.該區(qū)域富含GC以及缺少傳統(tǒng)的TATAbox和CCAAT box.4,連接體掃描突變及電泳遷移率改變實驗揭示了位于HE4啟動子(-71,-48)位的2個Sp1結(jié)合位點是該啟動子發(fā)揮作用的必需元件.5,甲基化特異性PCR結(jié)合測序反應(yīng)結(jié)果發(fā)現(xiàn)在HE4基因低表達細胞株SMMC-7721中HE4基因啟動子存在被甲基化現(xiàn)象,但是體外甲基化實驗提示DNA的甲基化可能沒有參與HE4基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控.6,共轉(zhuǎn)染實驗顯示外源性的轉(zhuǎn)錄因子Sp1