內(nèi)毒素休克主動(dòng)脈低反應(yīng)性機(jī)制的研究.pdf

1、目的 在建立大鼠內(nèi)毒素休克模型的基礎(chǔ)上觀察主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)有何改變;通過檢測(cè)各組主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)IP<,3> Ⅰ型受體的表達(dá)和體外主動(dòng)脈環(huán)灌流實(shí)驗(yàn)從而探討內(nèi)毒素休克中血管低反應(yīng)性的機(jī)制.材料和方法健康雄性Wistar大鼠,體重220-250克,分為四組:①大劑量脂多糖(LPS)組:靜脈注射LPS 10mg/kg.②小劑量LPS組:靜脈注射LPS 5mg/kg.③正常對(duì)照組:靜脈注射同等體積的生理鹽水.④大劑量LPS處死組:靜脈

2、注射LPS 10mg/kg后監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈壓的變化,在平均動(dòng)脈壓開始出現(xiàn)上升波時(shí)處死.每只動(dòng)物觀察6小時(shí),監(jiān)測(cè)平均動(dòng)脈壓和心率的變化,分別于注藥前和注藥后30分鐘,60分鐘,90分鐘,2小時(shí),3小時(shí),4小時(shí),6小時(shí)取血0.5ml,離心后取上清-70℃凍存.觀察結(jié)束后取胸主動(dòng)脈,進(jìn)行以下操作.1.常規(guī)石蠟包埋切片,HE染色,光鏡下觀察形態(tài)學(xué)的改變.2.將標(biāo)本用2.5％戊二醛和1％鋨酸雙固定,常規(guī)超薄切片,鈾鉛雙重染色,JEM-1200EX透

3、射電鏡下觀察主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)的改變.3.雙抗體夾心ELISA法檢測(cè)血清中TNFα濃度.4.免疫組化檢測(cè)各組標(biāo)本主動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞內(nèi)IP3Ⅰ型受體的表達(dá).同時(shí)做體外實(shí)驗(yàn)檢測(cè)小劑量TNFα對(duì)主動(dòng)脈環(huán)的收縮功能有何影響.取健康大鼠胸主動(dòng)脈,小心分離周圍的結(jié)締組織后剪成3-5mm長(zhǎng)的主動(dòng)脈環(huán)備用.將標(biāo)本分為4組,分別給予TNFα5μg/l或Kreb液,孵育1小時(shí)后給予10<'-7>mmol/L血管緊張素Ⅱ,記錄收縮幅度.每個(gè)血管環(huán)對(duì)血管緊