腸上皮細(xì)胞內(nèi)毒素反應(yīng)性及其耐受內(nèi)毒素的分子機(jī)制研究.pdf

1、目的:①探討人正常腸上皮細(xì)胞(IEC)的分離、培養(yǎng)及鑒定方法.②觀察人腸上皮細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素刺激的反應(yīng)性,探討其耐受內(nèi)毒素的分子機(jī)制.結(jié)論:①選用嗜熱菌蛋白作酶作為分離IEC的消化酶,改善IEC的生長(zhǎng)環(huán)境,經(jīng)過(guò)簡(jiǎn)便的純化,即可獲得較純的IEC,完全可供相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究之用.②該研究以檢測(cè)NF-κB的激活和IL-8的分泌為客觀指標(biāo),首次觀察了小腸上皮細(xì)胞對(duì)內(nèi)毒素刺激的反應(yīng)性,進(jìn)一步證實(shí),與單核/巨噬細(xì)胞不同,腸上皮細(xì)胞呈內(nèi)毒素?zé)o反應(yīng)性.③首次用R

2、T-PCR和RPA兩種方法同時(shí)研究了人原代小腸上皮細(xì)胞和人小腸癌上皮細(xì)胞內(nèi)三種內(nèi)毒素相關(guān)受體mRNA的表達(dá)特點(diǎn),發(fā)現(xiàn)無(wú)論人原代小腸上皮細(xì)胞和人小腸癌上皮細(xì)胞TLR4,CD14和MD2呈低表達(dá)或不表達(dá).④采用基因轉(zhuǎn)染技術(shù),首次揭示了腸上皮細(xì)胞表面TLR4,CD14和MD2低表達(dá)或不表達(dá)與細(xì)胞內(nèi)毒素?zé)o反應(yīng)性之間的內(nèi)在聯(lián)系,明確了腸上皮細(xì)胞耐受內(nèi)毒素作用的分子機(jī)制,同時(shí)進(jìn)一步反證了CD14,TLR4和MD2在調(diào)控單核/巨噬細(xì)胞內(nèi)毒素跨膜信號(hào)轉(zhuǎn)