酮色林抗內(nèi)毒素休克的作用與機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：
　　 感染性休克是由病原微生物及其代謝產(chǎn)物在機(jī)體內(nèi)引起微循環(huán)障礙，導(dǎo)致細(xì)胞與器官代謝和功能損害的全身反應(yīng)性綜合征，臨床上最常見于革蘭氏陰性細(xì)菌感染，又稱為內(nèi)毒素休克。目前感染性休克的治療措施有很多，包括積極治療原發(fā)病、補(bǔ)充血容量、使用血管活性藥改善微循環(huán)、拮抗細(xì)胞因子防止細(xì)胞損傷、保護(hù)重要器官功能防止衰竭等。盡管其治療措施已經(jīng)取得了很大的進(jìn)展，如細(xì)胞因子的拮抗劑或單克隆抗體在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)都能取得一定的效果，但其臨床試驗(yàn)結(jié)

2、果卻令人失望；目前由感染性休克引起的病死率仍高達(dá)50％左右。因此，尋找新的有效治療感染性休克的方式極為重要。
　　 酮色林(ketanserin)，其化學(xué)結(jié)構(gòu)為吡啶衍生物。可選擇性阻斷5-HT2A受體，無部分激動(dòng)劑效應(yīng)；同時(shí)具有較弱的α1受體阻斷作用。在臨床上，酮色林主要用于治療高血壓。近年來，大量研究對酮色林的臨床應(yīng)用做出了新的拓展。如Kyriakides等對44名單一血管堵塞引起的穩(wěn)定心絞痛患者用酮色林治療的臨床實(shí)驗(yàn)觀察表明

3、，在冠狀動(dòng)脈球囊血管成形術(shù)術(shù)中，冠狀動(dòng)脈內(nèi)注入酮色林可顯著增加冠狀動(dòng)脈側(cè)枝的血流量減少心肌缺血的發(fā)生。這一結(jié)果不僅說明酮色林在冠狀動(dòng)脈球囊血管成形術(shù)中有預(yù)防心肌缺血的作用，也提示酮色林在治療心肌缺血方面可能有新的應(yīng)用。Quatresooz P等試用2％的酮色林軟膏局部涂擦治療糖尿病的腿足部潰瘍，結(jié)果表明酮色林可顯著改善潰瘍癥狀，提示酮色林對糖尿病的腿足部潰瘍的治療一定有價(jià)值，并推測其治療機(jī)制與阻斷二型五羥色胺受體、擴(kuò)張血管及改善局部微循

4、環(huán)有關(guān)。在內(nèi)毒素血癥動(dòng)物中，酮色林可以改善微循環(huán)并且可以顯著減少由內(nèi)毒素誘導(dǎo)的肥大細(xì)胞活化。但酮色林用于治療內(nèi)毒素休克，以及其治療內(nèi)毒素休克的機(jī)制研究目前還沒有沒有報(bào)道。
　　 動(dòng)脈壓力感受性反射(arteriAlbaroreflex，ABR)功能，是心血管系統(tǒng)活動(dòng)最重要的自身調(diào)節(jié)機(jī)制之一，ABR功能通常用壓力感受性反射敏感性(Baroreflex sensitivity，BRS)來表示。近年來研究發(fā)現(xiàn)，ABR功能異常，參與了多

5、種心血管系統(tǒng)疾病的發(fā)生發(fā)展過程。大量文獻(xiàn)表明，ABR功能缺陷導(dǎo)致心肌缺血，心律失常，糖尿病等病人的預(yù)后不良。我們課題組在前期的研究中發(fā)現(xiàn)，在內(nèi)毒素休克的發(fā)生發(fā)展中，ABR功能發(fā)揮了重要的作用。在利用去竇弓神經(jīng)術(shù)（sinoaortic denervation，SAD)破壞大鼠的ABR功能后，靜脈注射內(nèi)毒素（lipopolysaccharide，LPS）誘導(dǎo)感染性休克模型，結(jié)果發(fā)現(xiàn)SAD組動(dòng)物的生存時(shí)間顯著低于假手術(shù)組；在SAD術(shù)后進(jìn)行盲腸

6、結(jié)扎穿孔（cecAlligation and puncture，CLP）制備大鼠感染性休克模型的實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)SAD組動(dòng)物的血清中炎癥因子TNF-α的水平顯著高于假手術(shù)組，并且其生存時(shí)間也顯著低于假手術(shù)組。這些研究結(jié)果提示，ABR功能缺陷可能是感染性休克預(yù)后不良的一個(gè)預(yù)測因子。因此，我們提出了假設(shè)：酮色林可以通過改善動(dòng)物的動(dòng)脈壓力感受性反射功能從而達(dá)到治療感染性休克的作用。
　　 研究方法：
　　 本研究以內(nèi)毒素誘導(dǎo)的休克

7、為模型，利用整體動(dòng)物學(xué)實(shí)驗(yàn)方法研究酮色林對內(nèi)毒素休克的治療作用及其機(jī)制。首先，用不同劑量酮色林進(jìn)行治療后，觀察動(dòng)物72小時(shí)的生存狀況；并檢測不同劑量組動(dòng)物血清中炎癥因子水平的表達(dá)變化以及肝臟的病理損傷情況。其次，利用清醒動(dòng)物連續(xù)測壓系統(tǒng)研究酮色林對內(nèi)毒素休克動(dòng)物血壓及心率的影響，并測定動(dòng)物的BRS值，觀測酮色林對內(nèi)毒素休克動(dòng)物動(dòng)脈壓力感受性反射功能(ABR)的影響。最后，通過SAD手術(shù)破壞動(dòng)物的ABR功能，給予LPS誘導(dǎo)內(nèi)毒素休克模型，

8、觀察酮色林對內(nèi)毒素休克小鼠72小時(shí)生存率的影響，進(jìn)一步探討酮色林治療內(nèi)毒素休克的作用機(jī)制。
　　 結(jié)果：
　　 1.以內(nèi)毒素誘導(dǎo)的休克小鼠為模型，分別給予不同劑量（0.3-10mg/kg）的酮色林治療，觀察小鼠72小時(shí)生存率。結(jié)果顯示酮色林能劑量依賴性地提高內(nèi)毒素休克小鼠的72小時(shí)生存率；
　　 2.不同劑量的酮色林治療能顯著抑制內(nèi)毒素休克小鼠血清中促炎因子TNF-α，IL-1β的水平，而大劑量的酮色林（10mg

9、/kg）不僅能降低TNF-α，IL-1β的水平，而且能有意義地提高抗炎因子IL-10的水平。此外，酮色林治療能夠顯著改善內(nèi)毒素休克小鼠的肝臟炎性病理改變。
　　 3.在IL-10基因敲除小鼠，腹腔注射內(nèi)毒素誘導(dǎo)休克模型，發(fā)現(xiàn)其血清中炎癥因子TNF-α水平顯著高于對照野生型小鼠；給予酮色林治療后，發(fā)現(xiàn)酮色林仍能抑制內(nèi)毒素誘導(dǎo)的血清TNF-α水平升高，說明在內(nèi)毒素休克小鼠，酮色林抑制炎癥因子分泌的作用不是通過IL-10介導(dǎo)的。

10、>　　 4.在WKY大鼠腹腔注射內(nèi)毒素，然后給予酮色林治療，發(fā)現(xiàn)酮色林治療并不改變休克大鼠的血壓與心率。但是，與對照組相比，治療組大鼠的生存時(shí)間顯著延長。
　　 5.在WKY大鼠，分別測定注射內(nèi)毒素前后以及酮色林治療前后大鼠的BRS，結(jié)果表明內(nèi)毒素注射能夠顯著降低大鼠的BRS；給予酮色林治療后，其BRS仍然降低，但酮色林治療后其BRS的降低幅度較單獨(dú)注射內(nèi)毒素組明顯減小，說明酮色林能夠改善內(nèi)毒素休克時(shí)的BRS降低。