利膽排毒口服液抗內(nèi)毒素的作用研究.pdf

1、目的： 1．對(duì)中西醫(yī)藥治療內(nèi)毒素血癥的現(xiàn)代研究思路、方法及成果進(jìn)行歸納與總結(jié)，并探索新的研究途徑與方法。 2．研制開發(fā)治療內(nèi)毒素血癥的中藥復(fù)方新制劑-----利膽排毒口服液。 3．探討利膽排毒口服液防治內(nèi)毒素血癥的機(jī)制，驗(yàn)證該制劑的有效性、安全性。 方法： 1．通過文獻(xiàn)研究，對(duì)中西醫(yī)抗內(nèi)毒素研究成果進(jìn)行歸納總結(jié)，提出內(nèi)毒素血癥病機(jī)假說、相應(yīng)治療方案，并進(jìn)行了理論論證。以此假說為指導(dǎo)，選擇有效的單味

2、藥和基礎(chǔ)方，再通過實(shí)驗(yàn)確定最佳處方組成。 2．通過體外鱟試劑反應(yīng)，篩選有效的抗內(nèi)毒素單味藥或活性成分。 3．用二倍稀釋法，研究單味中藥的抗大腸桿菌作用，并求出各藥的最低抑菌濃度(MIC)。 4．選擇幾種抗菌作用較強(qiáng)的中藥與大腸桿菌作用，研究大腸桿菌釋放內(nèi)毒素的水平。 5．以醋酸鉛(PbAc)為增敏劑制作小鼠內(nèi)毒素病理模型，為中藥處方篩選及其它藥效學(xué)研究打下基礎(chǔ)。 6．根據(jù)處方組成，結(jié)合各單味藥的理

3、化性質(zhì)、預(yù)試驗(yàn)藥物與藥效學(xué)關(guān)系、臨床最佳適用劑型需求等，通過文獻(xiàn)研究及正交試驗(yàn)法優(yōu)選提取與純化工藝條件，確定利膽排毒口服液制備成型工藝。 7．以小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，灌胃200％利膽排毒口服液，觀察用藥后小鼠的活動(dòng)及死亡情況，研究該制劑的安全性。 8．分別以PbAc和D-氨基半乳糖增敏的內(nèi)毒素病理模型小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，灌胃給藥，觀察用藥后小鼠的死亡率。 9．采用腸管運(yùn)動(dòng)在體實(shí)驗(yàn)法測(cè)定小鼠排便時(shí)間、頻率和碳粒腸推進(jìn)距離。

4、 10．以小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，灌胃利膽排毒口服液，觀察對(duì)二甲苯誘發(fā)小鼠耳廓腫脹、醋酸所致小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性的影響。 11．通過小白鼠碳粒廊清試驗(yàn)，觀察利膽排毒口服液的免疫清除作用。 12．以大鼠膽汁流量的變化為指標(biāo)，研究利膽排毒口服液是否有利膽作用；CCL4肝損傷試驗(yàn)研究利膽排毒口服液的保肝作用。 13．給大鼠注入利膽排毒口服液后，采取膽汁及尿液，采用顯色基質(zhì)法測(cè)定內(nèi)毒素含量。 14．采用鱟試劑試管

5、凝集反應(yīng)、顯色基質(zhì)偶氮法進(jìn)行利膽排毒口服液體外抗內(nèi)毒素的實(shí)驗(yàn)研究。采用電鏡法觀察其對(duì)內(nèi)毒素顯微結(jié)構(gòu)的直接裂解作用。 15．用二倍稀釋法，研究利膽排毒口服液的抗大腸桿菌作用，并求出利膽排毒口服液的最低抑菌濃度(MIC)。 16．用大腸桿菌內(nèi)毒素(LPS)靜脈注射造成家兔內(nèi)毒素血癥模型，觀察利膽排毒口服液對(duì)模型動(dòng)物的解熱作用。 17．用大腸桿菌內(nèi)毒素靜脈注射造成家兔內(nèi)毒素血癥模型，檢測(cè)利膽排毒口服液對(duì)模型動(dòng)物的 LP

6、S 含量、腫瘤壞死因子水平的影響。 18．給兔灌服利膽排毒口服液后，采取血清進(jìn)行血清滅活內(nèi)毒素研究。 19．以兔為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，注射大劑量內(nèi)毒素，觀察用藥或不用藥兔的組織切片病理結(jié)果。以D-氨基半乳糖增敏的內(nèi)毒素病理模型小鼠為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，灌胃給藥，觀察用藥后小鼠的組織切片病理結(jié)果。 結(jié)果： 1．提出了內(nèi)毒素血證病機(jī)假說、治療方案，并進(jìn)行了理論論證。 2．根據(jù)假說，提出了中藥抗內(nèi)毒素血癥的新組方思路，在此

7、組方思路指導(dǎo)下，將茵陳蒿湯為基礎(chǔ)進(jìn)行加減，篩選出抗內(nèi)毒素血癥新復(fù)方---利膽排毒口服液。 3．中藥對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素釋放的影響研究結(jié)果表明，不同中藥對(duì)內(nèi)毒素釋放影響不同。中藥對(duì)內(nèi)毒素釋放的狀況與抗生素相比有著很大差異，這種特征有利于中藥對(duì)內(nèi)毒素血癥的控制與治療。 4．各中藥抗大腸桿菌(G-)的最小抑菌濃度(MIC)分別為黃連0.125、赤芍0.125、生大黃0.25、虎杖0.25、連翹0.25、敗醬草0.25、蒲公英0.5、枳

8、實(shí)0.5、白頭翁0.5、金銀花0.5、黃芩0.5、丹參0.5、茵陳1、甘草1、梔子1、柴胡1(g/mL)；利膽排毒口服液MIC為0.125 g/mL。 5．各單味藥或活性成分抗內(nèi)毒素最小稀釋濃度分別為黃連素 0.1：125、苦參堿0.1、脫氧膽酸鈉 0.1：625、甘氨酸 0.5、黃芩苷 0.1：625、梔子苷 0.1：25、甘草0.1、金銀花0.1、大黃 0.1：5、連翹 0.1、白頭翁 0.1：5、黃芪 0.1：5、金錢草0

9、.1(g/mL)：利膽排毒口服液抗內(nèi)毒素最小稀釋濃度為0.1：125 g/mL。 6．利膽排毒口服液制備工藝穩(wěn)定可行，質(zhì)量穩(wěn)定可控。 7．利膽排毒口服液體外鱟試劑反應(yīng)、電鏡超微結(jié)構(gòu)觀察顯示，利膽排毒口服液對(duì)內(nèi)毒素有直接的破壞、降解、滅活作用。 8．PbAC對(duì)小鼠增敏明顯，結(jié)果準(zhǔn)確可靠。對(duì)比研究結(jié)果表明，以PbAC為增敏劑制作的小鼠內(nèi)毒素病理模型是成功的。 9．以PbAC增敏的內(nèi)毒素病理模型小鼠，對(duì)照組死亡

10、率100％，利膽排毒口服組死亡率0％；以D-氨基半乳糖增敏的內(nèi)毒素病理模型小鼠，對(duì)照組死亡率100％，地塞米松組死亡率60％，利膽排毒口服組死亡率20％。 10．小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，利膽排毒口服液能增強(qiáng)小鼠吞噬功能，降低小鼠腸毛細(xì)血管通透性，對(duì)抗二甲苯引起的炎癥反應(yīng)，促進(jìn)小鼠腸推進(jìn)功能。 11．最大耐受量試驗(yàn)顯示，利膽排毒口服液對(duì)小鼠無毒副作用。 12．大鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，利膽排毒口服液能促進(jìn)膽汁分泌，保護(hù)肝

11、臟免受四氯化碳的損傷，減少膽汁及尿液中內(nèi)毒素含量。 13．兔體內(nèi)實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，利膽排毒口服液能抑制模型動(dòng)物的發(fā)熱效應(yīng)，減少兔血漿內(nèi)毒素含量，降低血漿腫瘤壞死因子(TNF-a)水平。 14．兔血清藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，利膽排毒口服液能增強(qiáng)兔血清體外滅活內(nèi)毒素的能力。 15．利膽排毒口服對(duì)大劑量內(nèi)毒素所引起的兔病理損傷有良好的防護(hù)作用。對(duì)D-氨基半乳糖增敏的內(nèi)毒素病理模型小鼠病理損傷也有良好的防護(hù)作用。 結(jié)論：

12、 1．利膽排毒口服液制備工藝穩(wěn)定，質(zhì)量可控，具有多方面的藥理作用，毒副作用小，對(duì)內(nèi)毒素血癥具有明確的療效。其對(duì)內(nèi)毒素血癥的治療一方面是其對(duì)內(nèi)毒素的直接裂解、滅活，另一方面是通過利膽、促進(jìn)腸推進(jìn)、解熱、抗炎、降低體內(nèi)炎性介質(zhì)等多途徑、多靶點(diǎn)的作用來實(shí)現(xiàn)的。 2．在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，以最新醫(yī)藥研究成果為基礎(chǔ)，從中藥中篩選出了對(duì)內(nèi)毒素?fù)p傷小鼠高保護(hù)率的新復(fù)方---利膽排毒口服液。利膽排毒口服液的研究，驗(yàn)證了我們假說的正確性，也驗(yàn)證了

13、通過利膽排毒為主多法聯(lián)合運(yùn)用來防治內(nèi)毒素性疾病設(shè)想的可行性，將為內(nèi)毒素血癥的防治提供新的手段，相信其將具有良好的開發(fā)、應(yīng)用前景。 創(chuàng)新點(diǎn)： 1．提出了內(nèi)毒素血證病機(jī)假說，并進(jìn)行了理論論證。 2．根據(jù)假說，擬定了中藥抗內(nèi)毒素血癥的組方，對(duì)組方理論進(jìn)行了理論探討并進(jìn)行實(shí)驗(yàn)研究，結(jié)果表明該組方對(duì)PbAC為增敏劑的致命性小鼠內(nèi)毒素血癥模型保護(hù)率可達(dá)到100％，對(duì)氨基半乳糖致敏的致命性小鼠內(nèi)毒素血癥模型保護(hù)率可達(dá)到80％，