尼妥珠單抗包被的四氧化三鐵納米顆粒對(duì)肺癌細(xì)胞放射增敏及磁共振顯像的研究.pdf

1、目的：尼妥珠單抗(Nimotuzumab，hR3)是表皮生長(zhǎng)因子單克隆抗體，對(duì)多種實(shí)體瘤細(xì)胞具有明顯的放療增敏作用，四氧化三鐵納米粒子有良好的磁共振信號(hào)敏感性，本研究探討尼妥珠單抗包被的四氧化三鐵納米顆粒(hR3-SPIO)對(duì)肺癌A549細(xì)胞的放射增敏作用和對(duì)肺癌細(xì)胞體外磁共振成像的影響。
　　 方法：1、將呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期肺癌A549細(xì)胞接種于96孔板，設(shè)空白對(duì)照組及hR3-SPIO組，其中后者設(shè)12.5、25、50、100、20

2、0ug/ml共五個(gè)濃度梯度，應(yīng)用MTT法檢測(cè)各組細(xì)胞增殖情況；2、將細(xì)胞接種于24孔板中，分為照射組、hR3-SPIO+照射組，其中hR3-SPIO+照射組于藥物處理后12h、24h、48h分別給予0、1、2、4、6、8、10Gy照射，集落形成法檢測(cè)細(xì)胞增殖和細(xì)胞存活率；用單擊多靶模型擬合劑量存活曲線；求出輻射增敏比(SER)，評(píng)價(jià)增敏效果；3、將呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞接種于6孔培養(yǎng)板，設(shè)空白對(duì)照組、照射組、hR3-SPIO組，hR3-S

3、PIO+照射組，應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)各組細(xì)胞周期分布情況；4、將呈對(duì)數(shù)生長(zhǎng)的腫瘤細(xì)胞接種于六孔板的細(xì)胞，設(shè)置空白對(duì)照組，照射組，hR3-SPIO組，hR3-SPIO(培養(yǎng)12h)+照射組，hR3-SPIO(培養(yǎng)24h)+照射組，hR3-SPIO(培養(yǎng)48h)+照射組，應(yīng)用WesternBlot法檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白bcl-2、bax、caspase-3的表達(dá)情況；5、將hR3-SPIO、hR3、SPIO分別與A549細(xì)胞孵育，同時(shí)設(shè)立對(duì)照組，

4、體外磁共振成像(MRI)觀察各組T2弛豫時(shí)間。
　　 結(jié)果：1、不同濃度的hR3-SPIO在12.5-200ug/ml濃度范圍內(nèi)，隨著濃度逐漸增大，腫瘤細(xì)胞的OD值逐漸下降，與空白對(duì)照組相比具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p<0.05)，腫瘤細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率逐漸增加，hR3-SPIO復(fù)合物對(duì)肺癌A549細(xì)胞株具有抑制增殖的作用，呈明顯量-效關(guān)系；2、hR3-SPIO對(duì)肺癌A549細(xì)胞有放射增敏作用，25ug/mlhR3-SPIO培養(yǎng)48h的放射

5、增敏比(SER)為1.28；3、hR3-SPIO與放療聯(lián)合作用下細(xì)胞G2/M期比例升高至56.74±0.05％，與照射組比較，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)；4、Western blot分析表明用藥后凋亡抑制蛋白bcl-2表達(dá)降低，凋亡促進(jìn)蛋白bax及calspase-3表達(dá)增加；5、體外MRI顯示hR3-SPIO組T2弛豫時(shí)間低于其它三組(P<0.05)。
　　 結(jié)論：hR3-SPIO對(duì)肺癌A549細(xì)胞有毒性作用和有放射增敏性