瓦勒變性的調(diào)控暨對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)再生的影響研究.pdf

1、周圍神經(jīng)損傷后,傷口處和遠(yuǎn)側(cè)段全長(zhǎng)神經(jīng)纖維發(fā)生瓦勒變性,由于部分神經(jīng)元凋亡,局部疤痕增生,吻合口處感覺、運(yùn)動(dòng)神經(jīng)纖維軸突易相互錯(cuò)長(zhǎng),長(zhǎng)期失神經(jīng)支配后終末器官萎縮、變性等有害因素,導(dǎo)致治療后功能恢復(fù)多數(shù)并不理想.因此神經(jīng)損傷后的形態(tài)學(xué)變化和各種促進(jìn)神經(jīng)再生及功能恢復(fù)的方法成為近年來研究的熱點(diǎn).目的:為了研究不同程度瓦勒變性對(duì)大鼠坐骨神經(jīng)再生與功能恢復(fù)的影響及白細(xì)胞介素-1β對(duì)神經(jīng)再生的影響機(jī)制,以及神經(jīng)損傷后變性與再生過程的形態(tài)學(xué)變化規(guī)律

2、,探索周圍神經(jīng)再生過程的可視化研究方法,為周圍神經(jīng)的治療提供理論依據(jù).材料與方法:該課題第一部分研究在大鼠坐骨神經(jīng)切割傷模型中分別利用白細(xì)胞介素-1β(IL-1β)和二氯亞甲基二磷酸鹽脂質(zhì)體(Cl<,2>MDP)干預(yù)神經(jīng)變性過程,損傷后1、3、5、7、15、30、60、90天用組織學(xué)方法、免疫組化方法檢測(cè)損傷后不同時(shí)間點(diǎn)坐骨神經(jīng)斷端巨噬細(xì)胞的聚集與瓦勒變性程度,結(jié)合坐骨神經(jīng)功能指數(shù)(SFI)、神經(jīng)電生理等指標(biāo)的恢復(fù)情況,評(píng)估不同程度的瓦

3、勒變性對(duì)神經(jīng)再生的影響.課題第二部分利用免疫組化方法檢測(cè)損傷局部神經(jīng)生長(zhǎng)因子及膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的動(dòng)態(tài)表達(dá)變化,結(jié)合組織學(xué)方法及軸突圖像分析,探索白細(xì)胞介素-1β在神經(jīng)損傷與再生中的作用機(jī)制.課題第三部分對(duì)不同時(shí)間點(diǎn)、不同部位的坐骨神經(jīng)進(jìn)行連續(xù)切片,經(jīng)過改良三色染色法染色后光學(xué)顯微鏡觀察并攝像后輸入微機(jī)進(jìn)行圖像配準(zhǔn)和二維處理,再利用圖形工作站對(duì)坐骨神經(jīng)損傷后變性、再生過程中典型的顯微形態(tài)結(jié)構(gòu)進(jìn)行三維重建和顯示,探討坐骨神經(jīng)再生過程

4、的形態(tài)特征及量化規(guī)律.結(jié)果:1. 傷后3天、7天硅膠管內(nèi)可見淡紅色膠凍樣物質(zhì),組織易碎;傷后15天白細(xì)胞介素-1β處理組可見纖細(xì)淺紅色條索狀物把坐骨神經(jīng)兩斷端連接起來;傷后30~90天各組硅膠管內(nèi)再生神經(jīng)逐漸變粗、變韌,顏色呈亮白色,但是白細(xì)胞介素-1β處理組再生神經(jīng)直徑明顯大于Cl<,2>MDP處理組和對(duì)照組,而后兩組沒有顯著差異.2. 光鏡及電鏡結(jié)果顯示,IL-1β處理組神經(jīng)損傷后巨噬細(xì)胞聚集的時(shí)間及軸突斷裂、髓鞘崩解的時(shí)間均較早,

5、變性組織清除也相應(yīng)較快,增生的膠原纖維較少;再生神經(jīng)軸突直徑、數(shù)量及髓鞘厚度均優(yōu)于對(duì)照組.Cl<,2>MDP處理組早期很少有巨噬細(xì)胞出現(xiàn)于神經(jīng)斷端,變性組織清除較慢,再生神經(jīng)分布密度也較小.3.坐骨神經(jīng)功能指數(shù)測(cè)定結(jié)果顯示,白細(xì)胞介素-1β處理組坐骨神經(jīng)功能指數(shù)恢復(fù)較快而且較好,Cl<,2>MDP處理組早期恢復(fù)不如對(duì)照組,但后期與對(duì)照組差異不顯著.4.神經(jīng)電生理結(jié)果顯示,白細(xì)胞介素-1β處理組神經(jīng)傳導(dǎo)速度及復(fù)合肌肉動(dòng)作電位波幅的恢復(fù)明顯

6、優(yōu)于其余兩組(P<0.01);Cl<,2>MDP處理組復(fù)合肌肉動(dòng)作電位波幅較對(duì)照組差(P<0.01),神經(jīng)傳導(dǎo)速度與對(duì)照組相比早期較差(P<0.01),晚期則無明顯差異(P>0.05).5.神經(jīng)損傷早期,白細(xì)胞介素-1β處理組損傷局部神經(jīng)生長(zhǎng)因子及膠質(zhì)細(xì)胞源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的表達(dá)明顯高于同一時(shí)期的對(duì)照組(P<0.01),神經(jīng)再生晚期無明顯差異性.6.再生神經(jīng)軸突圖像分析結(jié)果顯示,白細(xì)胞介素-1β處理組再生神經(jīng)的有髓神經(jīng)纖維的數(shù)目和軸突直徑

7、、髓鞘厚度均明顯優(yōu)于對(duì)照組(P<0.01).7.利用改良三色法對(duì)正常及再生神經(jīng)進(jìn)行染色并于光鏡下攝像,輸入微機(jī)進(jìn)行圖像配準(zhǔn)和二維處理,在圖形工作站中進(jìn)行三維重建和顯示,三維圖像顯示神經(jīng)變性和再生過程較為典型的病理結(jié)構(gòu),如Bungner帶的形成,郎飛氏節(jié)的結(jié)構(gòu)等.結(jié)論:1. 白細(xì)胞介素-1β可加劇神經(jīng)損傷后瓦勒變性,使其變性組織清除加快,神經(jīng)再生的程度及功能恢復(fù)較好.二氯亞甲基二磷酸鹽脂質(zhì)體耗竭了大鼠的單核細(xì)胞后,致使神經(jīng)損傷后的變性組織