TOLL樣受體4信號對大鼠周圍神經(jīng)損傷后瓦勒變性及神經(jīng)再生的影響.pdf

1、目的：建立大鼠坐骨神經(jīng)離斷模型，產(chǎn)生瓦勒變性現(xiàn)象；靶向調(diào)控TOLL樣受體4(TLR4)信號通路，探討TLR4通路對大鼠坐骨神經(jīng)損傷早期瓦勒變性和神經(jīng)再生的影響。
　　方法：構建大鼠周圍神經(jīng)離斷模型，觀察瓦勒變性。將40只Wistar大鼠隨機分為2組：假手術組(20只)和模型組(20只)。大鼠坐骨神經(jīng)離斷模型中干預TOLL樣受體4（TLR4）信號通路。將60只Wistar大鼠隨機分為3組：對照組（G1）(20只)，TAK-242組（

2、G2）（20只）和LPS組（G3）（20只）。模型組，對照組，TAK-242組和LPS組橫斷大鼠右側(cè)坐骨神經(jīng)后，行神經(jīng)外膜端端吻合；假手術組顯露坐骨神經(jīng)不橫斷，逐層縫合切口。TAK-242組術前1 h及術后7 d大鼠每天尾靜脈注射0.15 mg/kg TLR4拮抗劑TAK-242，LPS組大鼠在神經(jīng)斷端顯微注射LPS(2 g/L)1μL，對照組大鼠注射同等體積生理鹽水，模型組不作處理。于術后1.5 h、24 h、3 d、4 d和7d取術

3、側(cè)坐骨神經(jīng)。實時定量熒光PCR（qRT-PCR)檢測坐骨神經(jīng)中β-干擾素TIR結(jié)構域銜接蛋白（TRIF）mRNA、白介素1β（IL-1β）mRNA和單核細胞趨化蛋白-1(MCP-1)mRNA水平；免疫熒光法分析坐骨神經(jīng)中CD68+細胞和iba1+細胞的表達；勞克堅牢藍（LFB）染色觀察坐骨神經(jīng)髓鞘變化；蘇木精-伊紅（HE）染色觀察坐骨神經(jīng)的病理變化；免疫組化法檢測TRIF蛋白和生長相關蛋白43蛋白（GAP-43）的表達；坐骨神經(jīng)功能指數(shù)

4、(SFI)分析大鼠下肢運動功能。
　　結(jié)果：建立大鼠坐骨神經(jīng)離斷模型：與假手術組相比，①qRT-PCR顯示，模型組的IL-1β和MCP-1 mRNA表達水平均顯著升高(P＜0.001，P＜0.001)；②免疫熒光可見，模型組中CD68+細胞表達上調(diào)(P＜0.01)；④HE染色可見，模型組軸突完全斷裂，大量炎性細胞浸潤；③LFB染色可見，與假手術組相比，模型組損傷遠端發(fā)生脫髓鞘(P＜0.001)；⑤坐骨神經(jīng)功能指數(shù)（SFI）顯示，模

5、型組大鼠坐骨神經(jīng)功能完全喪失。大鼠離斷模型中干預TOLL樣受體4（TLR4）信號通路：①qRT-PCR顯示，與對照組相比，TAK-242組在TRIF、IL-1β和MCP-1 mRNA表達水平均顯著減低((P＜0.001，P＜0.001，P＜0.001)，LPS組IL-1β和MCP-1mRNA的表達明顯升高(P＜0.01,P＜0.01)；②免疫熒光可見，與對照組相比，iba1+細胞和CD68+細胞表達水平在TAK-242組均下調(diào)(P<0.

6、05，P<0.05),在LPS組均上調(diào)(P<0.05，P<0.05)；④HE染色可見，與對照組相比，炎性細胞及再生神經(jīng)纖維在TAK-242組較少，而在LPS組較多；③LFB染色可見，與對照組相比，神經(jīng)斷端髓鞘碎片清除率在TAK-242組降低(P＜0.05)，而在LPS組升高(P＜0.05)；⑤免疫組織化學可見，與對照組相比，TAK-242組中TRIF表達下調(diào)(P＜0.01)；GAP-43表達下調(diào)(P＜0.05)；⑤SFI顯示，與對照組相