骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植后在mdx鼠體內(nèi)的分布、定向分化及其機(jī)制研究.pdf

1、本實(shí)驗(yàn)擬在體外培養(yǎng)SD大鼠MSCs，應(yīng)用3H-TdR標(biāo)記后移植入DMD的模型鼠mdx鼠進(jìn)行移植，觀察MSCs移植后在體內(nèi)的分布情況；應(yīng)用BrdU標(biāo)記MSCs檢測(cè)Dystrophin和Utrophin在體內(nèi)的表達(dá)量和表達(dá)時(shí)間規(guī)律，以及其表達(dá)對(duì)mdx鼠的肌酸激酶(CK)、核中心移位的影響；并檢測(cè)MyoD和myogenin及骨骼肌的特異性標(biāo)志物胚胎型肌凝蛋白重鏈(devMHC)在體內(nèi)的表達(dá)量和表達(dá)時(shí)間規(guī)律，探討MSCs移植后在體內(nèi)分化為骨骼肌

2、的可能機(jī)制，為最終應(yīng)用于臨床實(shí)驗(yàn)提供理論基礎(chǔ)。結(jié)論:應(yīng)用3H-TdR標(biāo)記法可以有效地標(biāo)記MSCs進(jìn)行移植后的體內(nèi)分布研究，并且長(zhǎng)達(dá)4個(gè)月的追蹤，早期MSCs主要分布于血流豐富的器官，以后隨時(shí)間延長(zhǎng)MSCs具有明顯的歸巢現(xiàn)象，并可受病損肌肉的微環(huán)境影響向肌肉趨化，隨時(shí)間延長(zhǎng)MSCs在肌肉中分布逐漸增加。采用差速貼壁法將MSCs有效分離后，應(yīng)用BrdU標(biāo)記，標(biāo)記率可達(dá)98％以上，可以追蹤尾靜脈移植后MSCs在體內(nèi)的分化過程。應(yīng)用3H-TdR

3、標(biāo)記或者BrdU標(biāo)記MSCs并追蹤其在mdx鼠體內(nèi)變化，各組織器官均未發(fā)現(xiàn)腫瘤發(fā)生，因而MSCs移植是安全可靠的。MSCs移植后mdx鼠有DYS表達(dá)，并且隨時(shí)間延長(zhǎng)增加，應(yīng)用激光共聚焦技術(shù)表明DYS陽性肌纖維來自于移植的MSCs。Utrophin在mdx鼠肌膜表達(dá)上調(diào)，在DMD疾病中對(duì)DYS有一定的功能替代作用。MSCs移植后DYS的表達(dá)對(duì)Utrophin有抑制作用，二者存在互補(bǔ)關(guān)系，但Utrophin的mRNA水平卻無改變。MSCs移