過(guò)氯酸銨對(duì)甲狀腺細(xì)胞毒作用機(jī)制的研究.pdf

1、目的:過(guò)氯酸銨(Ammonium Perchlorate,AP)被廣泛用于軍事工業(yè)及民用化工行業(yè),易于通過(guò)呼吸道進(jìn)入作業(yè)人員體內(nèi),影響作業(yè)人員健康。研究表明AP可抑制甲狀腺細(xì)胞攝取合成其激素的原料碘,從而抑制甲狀腺正常功能,造成對(duì)人體健康的危害。本研究旨在通過(guò)對(duì)體外培養(yǎng)的人正常甲狀腺細(xì)胞Nthy-ori 3-1進(jìn)行染毒,探討AP對(duì)甲狀腺細(xì)胞的毒作用機(jī)制,為預(yù)防和控制AP對(duì)作業(yè)人員的職業(yè)危害提供理論依據(jù)。
　　方法:培養(yǎng)人正常甲狀腺

2、細(xì)胞Nthy-ori 3-1于5％CO2,37℃二氧化碳培養(yǎng)箱,待細(xì)胞生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,接種細(xì)胞至培養(yǎng)板繼續(xù)培養(yǎng)。培養(yǎng)板內(nèi)細(xì)胞進(jìn)入對(duì)數(shù)期后,分別給予AP劑量為0、5、10、20、40、60mmol/L的培養(yǎng)液進(jìn)行染毒,并于一定時(shí)間后,觀察細(xì)胞形態(tài)學(xué)變化,收集培養(yǎng)的細(xì)胞和培養(yǎng)上清液做以下指標(biāo)測(cè)定:用噻唑藍(lán)比色法(MTT法)測(cè)定細(xì)胞存活率,用比色法測(cè)定乳酸脫氫酶(LDH)、丙二醛(MDA)及超氧化物歧化酶(SOD)水平,用流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)法

3、測(cè)定細(xì)胞凋亡率,用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測(cè)定甲狀腺球蛋白(Tg)濃度。
　　結(jié)果:隨著AP染毒劑量的增加,各AP染毒劑量組細(xì)胞較對(duì)照組細(xì)胞貼壁能力減弱,脫落并懸浮于培養(yǎng)液中的懸浮細(xì)胞增多,細(xì)胞密度降低,體積縮小,形狀由長(zhǎng)梭形漸變?yōu)閳A形或不規(guī)則形;而對(duì)照組細(xì)胞未見(jiàn)以上異常變化。AP60mmol/L劑量作用于細(xì)胞12h、24h、48h、72h時(shí),細(xì)胞存活率分別為74.93%、42.26%、2.66%、0.99%,AP40mmol/L劑量作用

4、于細(xì)胞24h、48h、72h時(shí),細(xì)胞存活率分別為73.15%、30.91%、3.03%,各劑量組均較對(duì)照組(100%)顯著降低(P<0.05或P<0.01)。細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活力隨AP染毒劑量的增加而增大,40mmol/L劑量組細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活力為0.70U/mL,較對(duì)照組(0.55U/mL)顯著升高(P<0.01)。細(xì)胞凋亡率隨AP染毒劑量的增加而增大,10、20、40、60mmol/L劑量組細(xì)胞總凋亡率分別為23.04%、24

5、.27%、24.40%、33.50%,較對(duì)照組(15.66%)顯著增加(P<0.01);20、40、60mmol/L劑量組細(xì)胞早期凋亡率分別為15.70%、15.84%、16.96%,較對(duì)照組(9.54%)顯著增加(P<0.05或P<0.01);60mmol/L劑量組細(xì)胞晚期凋亡率為16.54%,較對(duì)照組(6.11%)顯著增加(P<0.01)。隨著AP染毒劑量的增加,各劑量組細(xì)胞培養(yǎng)液中MDA含量有降低的趨勢(shì),與對(duì)照組(2.36nmol

6、/mL)相比,僅5mmol/L劑量組(1.08nmol/mL)差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);各劑量組細(xì)胞培養(yǎng)液中SOD活力與對(duì)照組相比無(wú)明顯變化(P>0.05);各劑量組細(xì)胞培養(yǎng)液中Tg濃度有降低的趨勢(shì),但與對(duì)照組相比,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論:本研究通過(guò)人正常甲狀腺細(xì)胞Nthy-ori 3-1體外培養(yǎng),顯示AP可造成人甲狀腺細(xì)胞形態(tài)變化、細(xì)胞存活率下降及細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH活力升高,并可誘導(dǎo)人甲狀腺細(xì)胞發(fā)生