HPLC-ELSD法研究鹽酸甜菜堿在大鼠體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué).pdf

1、甜菜堿廣泛存在于動(dòng)植物和微生物體內(nèi)，作為甲基供體參與蛋氨酸循環(huán)，能明顯改善機(jī)體因缺少甲基所致的多種癥狀，可用于治療高同型半胱氨酸綜合征，并能保肝護(hù)腎、保持心臟與血管健康，此外還有抑制腫瘤、保護(hù)細(xì)胞抵抗高滲等諸多藥理作用。研究甜菜堿的藥物代謝動(dòng)力學(xué)，可以闡明甜菜堿在體內(nèi)的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律，為藥效研究提供重要的理論參數(shù)，并為甜菜堿相關(guān)新藥和保健品的開(kāi)發(fā)提供理論依據(jù)。 第一部分生物樣品中鹽酸甜菜堿的HPLC-ELSD測(cè)定法 目的：

2、根據(jù)甜菜堿的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)，建立大鼠血清、排泄物和各種組織中甜菜堿的HPLC-ELSD分析方法。 方法：（1）色譜柱采用大連依利特Hypersil胺基色譜柱（250×4.6mm，5μm），流動(dòng)相為乙腈-水-三乙胺（85：15：0.08），流速為1.0ml·min-1。檢測(cè)器采用美國(guó)Alltech ELSD2000型蒸發(fā)光散射檢測(cè)器，漂移管溫度為86.0℃，載氣流速為2.2L·min-1。（2）生物樣品處理的基本方法：取100μl樣品，

3、加入900μl甲醇進(jìn)行萃取和去蛋白，0.22μm和，微孔濾膜過(guò)濾，90℃水浴揮干，固體殘留物用150μl流動(dòng)相溶解，20μl進(jìn)樣。 結(jié)果：各生物樣品的線性范圍較寬（其中血清為0.5052～19.8588μg），回歸方程的r值為0.9977～0.9999，該分析方法檢測(cè)限為0.03μg，最低定量限為0.11μg，高、中、低三種不同濃度進(jìn)樣精密度實(shí)驗(yàn)的RSD值分別為1.74%，1.64%，0.50%，重復(fù)性實(shí)驗(yàn)的RSD值分別為1.7

4、6%，3.31%，6.32%，準(zhǔn)確度分別為98.57%、104.97%、83.20%，提取回收率分別為93.98%、91.40%、80.59%，樣品日內(nèi)穩(wěn)定性RSD為5.69～7.87%，日間穩(wěn)定性RSD為3.77～6.40%。 結(jié)論：建立了測(cè)定大鼠體內(nèi)各種生物樣品甜菜堿含量的HPLC-ELSD分析方法，該法靈敏度高，專屬性強(qiáng)，能夠滿足甜菜堿藥動(dòng)學(xué)研究的需要。 第二部分鹽酸甜菜堿在大鼠體內(nèi)的藥物代謝動(dòng)力學(xué)研究 目

5、的：研究大鼠在尾靜脈注射和灌胃給藥后兩種劑量的鹽酸甜菜堿在體內(nèi)的藥代動(dòng)力學(xué)特征，獲得可靠的藥動(dòng)學(xué)參數(shù)。 方法：（1）Wistar大鼠20只，隨機(jī)分為2組，每組10只。其中一組灌胃單次給鹽酸甜菜堿450mg·kg－1或112.5 mg·kg-1，于給藥前和給藥后10min、30 min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、18h、24h于尾尖取血約0.5ml。另外一組尾靜脈單次給鹽酸甜菜堿450mg·kg－1或1

6、12.5 mg·kg－1，于給藥前和給藥后5 min、15 min、30 min、45min、1h、1.5h、2h、3h、4h、6h、8h、12h、24h于尾尖取血約0.5ml。測(cè)定甜菜堿含量（Xa+X0），對(duì)應(yīng)扣除內(nèi)源性甜菜堿含量X0，記錄去底血清甜菜堿含量Xa。（2）采用3P97藥動(dòng)學(xué)軟件進(jìn)行自動(dòng)擬合處理，以最佳房室模型為標(biāo)準(zhǔn)分別計(jì)算每只大鼠的主要藥代動(dòng)力學(xué)參數(shù)并求出均值，利用統(tǒng)計(jì)矩法求算AUC及MRT值，并求算各劑量的絕對(duì)生物利用

7、度。 結(jié)果：大鼠灌胃兩個(gè)劑量的鹽酸甜菜堿后藥動(dòng)學(xué)行為符合一室開(kāi)放模型，而靜脈注射高、低兩個(gè)劑量的鹽酸甜菜堿后藥動(dòng)學(xué)行為符合三室開(kāi)放模型。主要藥動(dòng)學(xué)參數(shù)為：（1）ig.450mg·kg-1組：t1/2（ka）=1.14h，t1/2（ke）=4.34h，T（peak）=2.69h，MRT（0～t）=7.06h，CL/F（s）=0.371L·kg－1·h－1，V/F（c）=2.257L·kg－1；（2）ig.112.5mg·kg-1組

8、：t1/2（ka）=0.84h，t1/2（ke）=4.39h，T（peak）=1.80h，CL/F（s）=0.193L·kg－1·h－1，V/F（c）=1.229L·kg－1，MRT（0～t）=6.49h；（3）iv.450mg·kg-1組：t1/2 pi=0.18h，t1/2 alpha=1.30h，t1/2 beta=13.77h，Vc=0.198 L·kg－1·h－1，CL（s）=0.182L·kg－1·h－1，MRT（0～t）=

9、3.10h；（4）iv.112.5 mg·kg-1組：t1/2 pi=0.25h，t1/2 alpha=1.03h，t1/2beta=5.48h，Vc=0.326L·kg-1.h－1，CL（s）=0.181L·kg－1·h-1，MRT（0～t）=3.65h。 結(jié)論：大鼠灌胃給BTH后，吸收較快，血藥濃度約2h達(dá)峰，此后緩慢消除，t1/2（ke）約為4.3h，MRT（0～t）約為7h；大鼠尾靜脈注射給BTH后，起始階段血藥濃度下降

10、迅速，第一分布相半衰期t1/2 pi約為0.2h，第二分布相半衰期t1/2alpha約為1.2h，分布較快，此后緩慢消除，高劑量組的消除半衰期t1/2 beta明顯高于低劑量組。 第三部分鹽酸甜菜堿在大鼠體內(nèi)的組織分布研究 目的：測(cè)定大鼠各主要組織的甜菜堿含量，研究大鼠在給藥前和高劑量達(dá)峰時(shí)間的藥物組織分布特點(diǎn)。 方法：（1）大鼠內(nèi)源性甜菜堿組織分布測(cè)定：Wistar大鼠7只，斷頭處死，取各主要組織，測(cè)定內(nèi)源性甜

11、菜堿含量X0。（2）Wistar大鼠10只，按照450mg·kg-1的劑量灌胃給藥，2h后斷頭處死，取各主要組織，測(cè)定甜菜堿含量（Xa+X0）。 結(jié)果：內(nèi)源性甜菜堿在心、肺、肝、脾、腎、睪丸、腸中均可以檢測(cè)到，其中肝、腎、睪丸中的含量較高；在給大鼠ig.450mg·kg－1鹽酸甜菜堿兩小時(shí)后，肌肉和脂肪中依然未檢出甜菜堿，睪丸中的含量沒(méi)有明顯變化，腦、心臟、肺、脾和小腸中含量快速提高，并在肝、腎濃集。 結(jié)論：內(nèi)源性甜菜堿

12、主要集中在肝、腎、睪丸中，給藥后甜菜堿則向肝、腎、小腸濃集。 第四部分鹽酸甜菜堿在大鼠體內(nèi)的排泄研究 目的：測(cè)定大鼠在給藥前和給藥后尿液和糞便中Bet的含量，說(shuō)明排泄和代謝途徑的主次和比例關(guān)系。 方法：Wistar大鼠10只置代謝籠，按照450mg·kg-1的劑量灌胃給藥，收集給藥前24h及給藥后24h的尿液與糞便，測(cè)定內(nèi)源性甜菜堿排泄量及給藥后的藥物排泄量。 結(jié)果：大鼠在給藥后24h由尿液排泄的的甜菜堿