他克莫司對癲癇持續(xù)狀態(tài)大鼠海馬PKCδ表達(dá)的影響.pdf

1、背景及目的:癲癇(Epilepsy，EP)是大腦神經(jīng)元過度同步異常放電導(dǎo)致的神經(jīng)系統(tǒng)功能異常綜合征。癲癇持續(xù)狀態(tài)（Status Epilepticus，SE）是癲癇連續(xù)發(fā)作之間意識未完全恢復(fù)又頻繁再發(fā)，或發(fā)作持續(xù)30分鐘以上不自行停止，可導(dǎo)致急性或持續(xù)性的認(rèn)知及行為改變，是神經(jīng)內(nèi)科常見急癥之一。
　　 蛋白激酶C(Protein kinase C，PKC)參與神經(jīng)元的生長、分化和凋亡等生理病理過程。PKCδ是一種新型的PKC亞型

2、的成員，在各種刺激因素的作用下，PKCδ可促使caspase3活化，引起細(xì)胞凋亡。鈣調(diào)神經(jīng)磷酸酶(Calcineurin，CaN)為絲/蘇氨酸蛋白磷酸酶家族成員，我們既往研究結(jié)果表明，CaN可引起難治性癲癇，他克莫司(Tacrolimus，F(xiàn)K506)可通過特異性抑制CaN控制癲癇發(fā)生，逆轉(zhuǎn)神經(jīng)元損傷。已有研究發(fā)現(xiàn)，在腦缺血模型中，CaN活化后激活PKC，引起細(xì)胞內(nèi)信號傳導(dǎo)。在癲癇的病理生理過程中，關(guān)于PKC各亞型與CaN的相互作用，以

3、及對于神經(jīng)元損傷的影響，尚缺乏相關(guān)研究。
　　 本研究應(yīng)用Wistar大鼠建立氯化鋰-匹魯卡品癲癇持續(xù)狀態(tài)模型，觀察海馬形態(tài)學(xué)變化、PKCδ的表達(dá)及FK506對其的影響，探究CaN與依賴PKCδ的細(xì)胞凋亡途徑之間的關(guān)系。
　　 方法:
　　 1.動物模型:將108只健康成年雄性大鼠隨機(jī)分為對照組（Control組）、癲癇組（SE組）和FK506處理組（FK506組），每組36只。SE組與FK506組各分為6組，分

4、別于SE后3、6、12、24、72h及7d處死取材，對照組大鼠不建立癲癇模型，于對應(yīng)時間點(diǎn)處死。
　　 2.行為學(xué)觀察:根據(jù)Racine分級觀察大鼠癲癇發(fā)作行為變化，記錄癲癇發(fā)作潛伏期及發(fā)作程度。
　　 3.腦組織病理學(xué)觀察:HE染色觀察SE后7d海馬區(qū)神經(jīng)元的損傷。
　　 4.RT-PCR法:檢測SE后不同時點(diǎn)(3、6、12、24、72h)海馬PKCδmRNA的表達(dá)。
　　 5.免疫組織化學(xué)SP法:檢測

5、SE后不同時點(diǎn)(3、6、12、24、72h)海馬PKCδ蛋白的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1.FK506抑制癲癇發(fā)作:SE組和FK506組大鼠在注射匹魯卡品后均出現(xiàn)癲癇發(fā)作，開始發(fā)作程度較輕，逐漸加重，直至出現(xiàn)癲癇持續(xù)狀態(tài)。兩組發(fā)作潛伏期和發(fā)作程度不同。與SE組相比，F(xiàn)K506組大鼠潛伏期明顯延長(P＜0.01)，發(fā)作級別降低(P＜0.05);Control組大鼠無癇性發(fā)作。
　　 2.FK506減輕SE后海馬神

6、經(jīng)元損傷:在光鏡下，SE后7d Control組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元排列整齊，形態(tài)正常，無神經(jīng)元缺失;SE組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元排列紊亂，失去正常結(jié)構(gòu)，與對照組相比神經(jīng)元缺失嚴(yán)重(P＜0.05);FK506組大鼠海馬CA3區(qū)神經(jīng)元數(shù)目較對照組減少，但較SE組存活神經(jīng)元明顯增多（P＜0.05）。
　　 3.FK506抑制PKCδ的表達(dá):Control組PKCδ mRNA和蛋白僅有少量表達(dá);與Control組相比，SE組各個時點(diǎn)

7、PKCδ表達(dá)均顯著增多(P＜0.05)，SE后6h PKCδ mRNA表達(dá)最高，PKCδ蛋白的平均光密度值SE后12h達(dá)高峰(P＜0.01)，以后二者均逐漸降低，但72h仍高于對照組水平(P＜0.05); FK506組降低其表達(dá)，同時可減輕海馬神經(jīng)元損傷(P＜0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 FK506可能通過特異性抑制CaN間接調(diào)節(jié)依賴PKCδ的細(xì)胞凋亡途徑，減少SE后神經(jīng)元損傷，發(fā)揮抗癲癇和腦保護(hù)作用，為臨床應(yīng)用免疫