量子點(diǎn)誘導(dǎo)Hela細(xì)胞凋亡分子機(jī)制的研究.pdf

1、研究目的:
　　1、通過(guò)研究硫化鋅包被硒化鎘量子點(diǎn)(CdSe/ZnS QDs)基本物理及光學(xué)特征,驗(yàn)證其是否為一種適用于生物醫(yī)學(xué)的熒光染料。
　　2、通過(guò)檢測(cè) CdSe/ZnS QDs及氯化鎘(CdCl2)對(duì) Hela細(xì)胞活性及凋亡率的影響,探究 CdSe/ZnS QDs是否具有細(xì)胞毒性作用。
　　3、通過(guò)比較空白對(duì)照組、CdSe/ZnS QDs組及 CdCl2組 Hela細(xì)胞內(nèi) ROS產(chǎn)量,探究 CdSe/ZnS Q

2、Ds誘導(dǎo) Hela細(xì)胞凋亡可能的機(jī)制。
　　4、通過(guò)對(duì)凋亡相關(guān)蛋白的檢測(cè),進(jìn)一步闡述 CdSe/ZnS QDs誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡的機(jī)制。
　　方法:
　　本實(shí)驗(yàn)采用透射電子顯微鏡(Transmission electron microscope,TEM)、紫外分光光度計(jì)(Ultraviolet spectrophotometer)及熒光光譜儀(Fluorescence spectrometer)對(duì) CdSe/ZnS QDs進(jìn)

3、行表征。透射電子顯微鏡用于了解 CdSe/ZnS QDs的大小、形狀、外觀均一程度,紫外分光光度計(jì)用于檢測(cè) CdSe/ZnS QDs的吸收光波長(zhǎng)范圍,熒光光度計(jì)用于檢測(cè) CdSe/ZnS QDs所發(fā)射熒光波長(zhǎng)范圍。
　　在建立穩(wěn)定 Hela傳代細(xì)胞株,通過(guò) MTT實(shí)驗(yàn)比較不同濃度 CdSe/ZnS QDs及 CdCl2孵育 Hela細(xì)胞24 h后細(xì)胞活性的改變,再通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)比較不同濃度 CdSe/ZnS QDs及 CdCl2對(duì)

4、 Hela細(xì)胞凋亡率的影響。通過(guò)對(duì)比空白對(duì)照組、CdSe/ZnS QDs組及 CdCl2組 Hela細(xì)胞活性及凋亡率差異,初步判斷 CdSe CdSe/ZnS QDs是否具有細(xì)胞毒性。
　　通過(guò) DCFH-DA熒光探針檢測(cè)不同濃度 CdSe/ZnS QDs及 CdCl2孵育 Hela細(xì)胞24 h后細(xì)胞內(nèi) ROS量,并比較不同組之間 ROS量的差異,探究 CdSe/ZnS QDs對(duì) Hela細(xì)胞內(nèi) ROS量的影響。
　　最后通

5、過(guò) Western blot檢測(cè)不同濃度 CdSe/ZnS QDs及 CdCl2孵育 Hela細(xì)胞24 h后細(xì)胞內(nèi)凋亡相關(guān)蛋白 Bcl-2與 Bax表達(dá)量,對(duì)比不同組間 Bcl-2與 Bax蛋白表達(dá)量差異分析 CdSe/ZnS QDs對(duì)細(xì)胞內(nèi) Bcl-2與 Bax蛋白表達(dá)的影響并分析其可能的原因。
　　結(jié)果:
　　1、本實(shí)驗(yàn)所用 CdSe/ZnS QDs顆粒均勻呈球形,直徑小,具有良好的單分散性和晶體結(jié)構(gòu),激發(fā)光譜寬,發(fā)射光

6、譜連續(xù)且對(duì)稱。
　　2、CdSe/ZnS QDs對(duì) Hela細(xì)胞的毒性作用遠(yuǎn)強(qiáng)于 CdCl2,且其細(xì)胞毒性作用與給藥濃度呈正比。
　　3、 CdSe/ZnS QDs較 CdCl2誘導(dǎo) Hela內(nèi)產(chǎn)生更多的 ROS,且 CdSe QDs/ZnS對(duì) ROS的誘導(dǎo)效應(yīng)與給藥濃度成正比。
　　4、CdSe/ZnS QDs較 CdCl2誘導(dǎo) Hela細(xì)胞凋亡效應(yīng)更強(qiáng),且其誘導(dǎo)凋亡效應(yīng)與給藥濃度成正比。
　　5、CdSe/Z

7、nS QDs處理組細(xì)胞內(nèi) Bcl-2蛋白表達(dá)量較空白對(duì)照組及相應(yīng)CdCl2處理組少,而 Bax蛋白表達(dá)較空白對(duì)照組及相應(yīng) CdCl2處理組多。
　　結(jié)論:
　　1、CdSe/ZnS QDs直徑小,光學(xué)特性優(yōu),適用于生物醫(yī)學(xué)研究。
　　2、CdSe/ZnS QDs具有細(xì)胞毒性作用,其毒性作用強(qiáng)于 CdCl2,且毒性作用與給藥濃度成正比。
　　3、CdSe/ZnS QDs能通過(guò)促進(jìn)細(xì)胞內(nèi) ROS生成而誘導(dǎo) Hela細(xì)