刺果番荔枝誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡分子機(jī)制的研究.pdf

1、肝癌是最常見的非傳染性的疾病之一，該癌癥的發(fā)生率每年都有升高。當(dāng)前的治療手段如化學(xué)療法等的毒副作用大，因此尋找新型有效、安全的治療藥物是亟待解決的問題，而天然化合物是抗癌新藥的主要來源，逐漸引起了人們的關(guān)注。刺果番荔枝被俗稱作“癌癥殺手”，能導(dǎo)致多種腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，然而其抗癌及誘導(dǎo)凋亡的分子機(jī)制仍需要進(jìn)一步研究。本文針對刺果番荔枝葉片的乙醇提取物，以肝癌HepG2細(xì)胞作為細(xì)胞模型，探究該提取物能否以及如何誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞發(fā)生凋亡。

2、　　主要結(jié)果如下：
　　1. MTT法檢測到刺果番荔枝的提取物能夠降低肝癌HepG2細(xì)胞和結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116的活力，并呈時(shí)間和劑量依賴效應(yīng)；流式細(xì)胞術(shù)的結(jié)果顯示，該提取物可以促使SubG1期（指示凋亡細(xì)胞）細(xì)胞數(shù)增多，并具有劑量依賴效應(yīng)；TUNEL法結(jié)果顯示，提取物處理（120μg/ml）的細(xì)胞凋亡率明顯較高。
　　2.蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)結(jié)果：通過對比處理組和對照組的差異蛋白點(diǎn)，共找到14個(gè)差異蛋白并進(jìn)行了蛋白身份的鑒定；之

3、后對14個(gè)蛋白進(jìn)行KEGG通路分析尋找可能的分子通路，從分析結(jié)果中發(fā)現(xiàn)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激信號通路，并且有三個(gè)蛋白涉及其中：分別為HSP70、GRP94、DPI-5蛋白。
　　3.通過Western blot實(shí)驗(yàn)鑒定，該提取物增加了Bip和CHOP蛋白的表達(dá)量，提高了PERK和eIF2α的磷酸化水平，并呈現(xiàn)時(shí)間劑量依賴效應(yīng)。當(dāng)通過siRNA技術(shù)敲低CHOP蛋白的水平時(shí)，提取物引起的凋亡受到抑制，有時(shí)間依賴效應(yīng)。siCHOP敲低CHOP的表達(dá)

4、，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞的凋亡率較處理組明顯減小。
　　4.為了進(jìn)一步研究該提取物誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制，我們試圖檢測該提取物是否引起了腫瘤細(xì)胞內(nèi)活性氧(reactive oxygen species， ROS）的升高。通過DCFH-DA熒光探針定量細(xì)胞內(nèi)的ROS水平，并使用抗氧化劑NAC驗(yàn)證結(jié)果。發(fā)現(xiàn)提取物處理細(xì)胞2 h后，細(xì)胞內(nèi)ROS的水平較對照組顯著性升高，同時(shí)NAC能顯著性抑制提取物引起的ROS的升高和細(xì)胞凋亡。
　　結(jié)論：<