小鼠骨髓間充質(zhì)干細胞向平滑肌樣細胞分化過程中myocardin的表達.pdf

1、背景: 平滑肌細胞(SMC)的過度增生是血管病變發(fā)生發(fā)展中的重要環(huán)節(jié)。長久以來的觀點認為動脈粥樣硬化(AS)斑塊中的SMC源于中膜SMC的遷移和增生。雖然對于中膜SMC的遷移和增殖的分子機制做了大量的研究工作，但是至今仍沒有建立有效的阻止閉塞性血管重建的治療方法。然而近年來有報道，骨髓細胞參與了血管疾病的發(fā)生，發(fā)展。研究發(fā)現(xiàn)骨髓細胞可能具有分化成血管祖細胞的潛能，這種祖細胞遷移至受損的血管，分化成平滑肌細胞或內(nèi)皮細胞，參與血管的修復(fù)，重

2、塑和病變的形成。這些發(fā)現(xiàn)為探索血管疾病的新療法提供了基礎(chǔ)。但是骨髓細胞向平滑肌方向分化的分子機制仍不清楚。然而令人興奮的是近年來研究者發(fā)現(xiàn)了一個關(guān)鍵的促平滑肌分化因子-myocardin。目前對于myocardin的研究仍處于初步階段。 目地: 探討血小板源性生長因子-BB(PDGF-BB)及高濃度的胎牛血清(20％FBS)體外誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細胞(bone marrow mesenchymal stem cell，BMSC)定

3、向分化為平滑肌細胞的可行性及myocardin在此過程中的表達變化。 方法: 采用全骨髓貼壁分離和消化控制相結(jié)合分離小鼠BMSC，然后用PDGF-BB(50μg/L)聯(lián)合高濃度胎牛血清(20％FBS)誘導(dǎo)BMSC，分別于誘導(dǎo)前及誘導(dǎo)4天、8天后用免疫細胞化學(xué)法檢測細胞α-SMA，SM-MHC，myocardin的表達，同時在倒置相差顯微鏡下觀察細胞的形態(tài)學(xué)變化。 結(jié)果: 從單個細胞的形態(tài)上看，誘導(dǎo)前BMSC呈梭形，分支狀

4、或多邊形，誘導(dǎo)后的細胞體積略增加，仍以梭形細胞為主，但是誘導(dǎo)8天時細胞密集處出現(xiàn)束狀，漩渦狀排列，與SMC相似。細胞免疫組化顯示：誘導(dǎo)前及誘導(dǎo)4天、8天時，α-SMA，SM-MHC，myocardin三種蛋白的表達逐漸增強，平均灰度值逐漸降低，不同時間點組組之間統(tǒng)計學(xué)比較有顯著性差異(P<0.05)。 結(jié)論: PDGF-BB聯(lián)合高濃度的胎牛血清(20％FBS)可有效誘導(dǎo)BMSC向平滑肌樣細胞分化。myocardin在此分化過程中