骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞神經(jīng)元樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中端粒酶的變化.pdf

1、[目的]
　　 觀察體外鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向神經(jīng)元樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化過程中端粒酶的變化，了解分化過程中端粒酶逆轉(zhuǎn)錄酶與端粒酶的關(guān)系，為臨床進(jìn)行神經(jīng)元樣細(xì)胞應(yīng)用提供理論基礎(chǔ)。
　　 [方法]
　　 1.取SD大鼠骨髓，密度梯度離心和貼壁法分離和純化BMSCs，原代培養(yǎng)后傳代，觀察細(xì)胞形態(tài)特征，繪制生長曲線，流式細(xì)胞儀鑒定其表面抗原。
　　 2.取第3至5代培養(yǎng)的鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞，應(yīng)用β-巰基乙醇，二甲基亞砜/

2、丁羥茴香醚/依達(dá)拉奉(DMSO/BHA/EDR)聯(lián)合誘導(dǎo)法誘導(dǎo)其向神經(jīng)元樣細(xì)胞分化，觀察誘導(dǎo)分化后細(xì)胞形態(tài)變化，免疫細(xì)胞化學(xué)方法檢測細(xì)胞NSE、GFAP表達(dá)，TRAP-ELISA法檢測鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)前后端粒酶下活性的變化，RT-PCR檢測BMSCs分化前后TERT基因mRNA表達(dá)，Western blotting檢測BMSC分化前后TERT蛋白表達(dá)。
　　 [結(jié)果]
　　 1.密度梯度離心和貼壁法分離、純化培養(yǎng)的

3、hBMSCs呈梭狀，具有均質(zhì)性好，細(xì)胞增值活力強(qiáng)、傳代生長快的特點(diǎn)。流式細(xì)胞儀檢測BMSCs表面抗原，結(jié)果顯示CD29、CD44、CD105陽性，CD34、CD45陰性；
　　 2.經(jīng)DMSO/BHA/EDR誘導(dǎo)分化后大部分細(xì)胞表現(xiàn)為富有突起的錐狀細(xì)胞，突起延伸交織成網(wǎng)，呈現(xiàn)典型神經(jīng)元樣細(xì)胞，NSE陽性細(xì)胞率高表達(dá)，GFAP在實(shí)驗組中弱表達(dá)。TRAP-ELISA結(jié)果顯示誘導(dǎo)4h前細(xì)胞端粒酶活性性變化不明顯，當(dāng)誘導(dǎo)6h以后細(xì)胞端粒