誘導(dǎo)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元分化的研究.pdf

1、目的：探討人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(human bone marrow mesenchymal stemcells,hMSCs)在體外誘導(dǎo)向運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元分化的潛能。
　　 方法：取正常人新鮮骨髓,用密度梯度離心法分離hMSCs,在含有10％胎牛血清(FBS)的DMEM/F12培養(yǎng)基擴(kuò)增和培養(yǎng),通過(guò)細(xì)胞傳代純化hMSCs。利用傳代后的第1代hMSCs分為誘導(dǎo)組和對(duì)照組,誘導(dǎo)組的細(xì)胞在完全培養(yǎng)基中加入終濃度為10μg/L堿性成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因

2、子(bFGF)預(yù)處理24小時(shí)后,用0.5μg/ml維甲酸(RA)和1200 ng/mL音猬因子(Shh)聯(lián)合誘導(dǎo)10天。對(duì)照組不加上述誘導(dǎo)劑。光鏡下觀察其分化過(guò)程中hMSCs的形態(tài)變化；免疫細(xì)胞化學(xué)檢測(cè)誘導(dǎo)前后細(xì)胞是否表達(dá)神經(jīng)干細(xì)胞特異性標(biāo)志蛋白神經(jīng)巢蛋白(nestin)、神經(jīng)元細(xì)胞特異性烯醇化酶(NSE),并計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞所占比率；用流式細(xì)胞儀檢測(cè)是否產(chǎn)生運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元標(biāo)志物HB9及運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元在總的細(xì)胞數(shù)中所占比率,并用流式軟件分析結(jié)果。<

3、br>　　 結(jié)果：誘導(dǎo)組hMSCs經(jīng)誘導(dǎo)后能分化為具有典型神經(jīng)元形態(tài)的細(xì)胞,部分細(xì)胞表達(dá)nestin和NSE,表達(dá)率分別達(dá)到(25.00±4.47)％、(51.52±4.40)％:流式檢測(cè)誘導(dǎo)后運(yùn)動(dòng)神經(jīng)元特異性標(biāo)志蛋白HB9表達(dá),表達(dá)率達(dá)到(50.04±5.25)％。對(duì)照組細(xì)胞形態(tài)無(wú)改變,無(wú)nestin和NSE表達(dá):HB9表達(dá)小于5％,兩組差異有顯著性(p<0.05)。
　　 結(jié)論： hMSCs在體外條件下能誘導(dǎo)分化為運(yùn)動(dòng)神經(jīng)