PAX5通過(guò)結(jié)合RIP2調(diào)控多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞NF-kB信號(hào)通路.pdf

1、多發(fā)性骨髓瘤是一種惡性血液腫瘤，主要是B淋巴細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)變?yōu)榉置趩我活?lèi)型免疫球蛋白的惡性漿細(xì)胞并伴隨骨質(zhì)破壞，腎衰竭，貧血等一系列癥狀。導(dǎo)致多發(fā)性骨髓瘤發(fā)病的原因有很多，外界致癌因素例如電離輻射，化學(xué)致癌物和病毒感染等通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞染色體易位，表觀遺傳學(xué)變化和基因突變使B細(xì)胞基因組變的不穩(wěn)定，最終導(dǎo)致某些原癌基因的異常表達(dá)進(jìn)而發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化。研究者在對(duì)多發(fā)性骨髓瘤大量臨床病例的基因表達(dá)譜進(jìn)行大規(guī)模統(tǒng)計(jì)學(xué)分析后發(fā)現(xiàn)，一部分病人體內(nèi)的惡性漿細(xì)胞出

2、現(xiàn)PAX5的大量表達(dá)。PAX5是一種B細(xì)胞特異性表達(dá)的核轉(zhuǎn)錄因子，它主要通過(guò)促進(jìn)B淋巴細(xì)胞特異性基因（例如CD19，BLNK等）的轉(zhuǎn)錄，抑制非B系基因以及漿細(xì)胞分化必需基因（例如Notch1，XBP-1等）的表達(dá)來(lái)維持B細(xì)胞的特異性。PAX5在B淋巴細(xì)胞分化過(guò)程中的表達(dá)具有階段性，主要在原B細(xì)胞階段開(kāi)啟轉(zhuǎn)錄，在成熟B細(xì)胞向漿細(xì)胞的終末分化過(guò)程中它的表達(dá)被迅速的關(guān)閉了，PAX5表達(dá)沉默是B細(xì)胞進(jìn)行終末分化的必要條件之一。PAX5的高表達(dá)在

3、多發(fā)性骨髓瘤的發(fā)病以及治療中所扮演的角色一直以來(lái)缺乏關(guān)注，以此作為出發(fā)點(diǎn)來(lái)展開(kāi)研究。
　　利用基因沉默技術(shù)在高表達(dá)PAX5的多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞系IM9中穩(wěn)定敲低PAX5的表達(dá)水平，構(gòu)建了IM9/Contro1和IM9/PAX5-KD細(xì)胞系，在體外對(duì)這兩個(gè)細(xì)胞系的化療藥物敏感性進(jìn)行了研究。發(fā)現(xiàn)IM9/PAX5-KD細(xì)胞對(duì)于Bortezomib，Vinblastine和Doxorubicin誘導(dǎo)凋亡的敏感性明顯增強(qiáng)了，裸鼠荷瘤模型的結(jié)果

4、也顯示出PAX5能夠增強(qiáng)IM9細(xì)胞的體內(nèi)成瘤，減弱腫瘤對(duì)Bortezomib的敏感性。進(jìn)一步對(duì)PAX5誘導(dǎo)IM9細(xì)胞抗藥性的機(jī)制進(jìn)行研究，發(fā)現(xiàn)PAX5高表達(dá)能夠增強(qiáng)TNF-o和LPS誘導(dǎo)的NF-κB激活，并且這種調(diào)節(jié)作用是通過(guò)PAX5與蛋白激酶RIP2相互作用介導(dǎo)的。體外Pull down實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞內(nèi)CoIP檢測(cè)的結(jié)果都顯示出這兩個(gè)蛋白的相互作用結(jié)構(gòu)域分別是PAX5中間結(jié)構(gòu)域和RIP2激酶結(jié)構(gòu)域，并且PAX5的結(jié)合能夠促進(jìn)RIP2激酶結(jié)

5、構(gòu)域Ser176位點(diǎn)的磷酸化激活。RIP2是一個(gè)介導(dǎo)NOD蛋白向NF-κB傳遞激活信號(hào)的關(guān)鍵激酶，在實(shí)驗(yàn)中還觀察到RIP2通過(guò)其Ser176位點(diǎn)的磷酸化促進(jìn)了RIP2 K209位點(diǎn)的泛素鏈形成，進(jìn)而影響了TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB活化。因此，PAX5通過(guò)結(jié)合RIP2并促進(jìn)其Ser176位點(diǎn)的磷酸化激活參與到TNF-α等刺激物誘導(dǎo)的NF-κB活化信號(hào)傳遞。在藥物誘導(dǎo)NF-κB激活的檢測(cè)中，發(fā)現(xiàn)Bortezomib，Vimblastine和

6、Doxorubicin能夠通過(guò)磷酸化RIP2 Ser176位點(diǎn)來(lái)增強(qiáng)NF-κB活性，但是在PAX5表達(dá)沉默后這三種藥物對(duì)NF-κB通路的激活能力被大大削弱了，提示我們這一過(guò)程需要PAX5的參與。將NF-κB通路特異性抑制后，Bortezomib和Vinblastine誘導(dǎo)的IM9/Control與IM9/PAX5-KD細(xì)胞凋亡差異消失，因此PAX5介導(dǎo)的NF-κB通路激活在IM9細(xì)胞對(duì)于Bortezomib和Vinblastine的抗藥

7、性中起著決定性作用。
　　PAX5雖然已經(jīng)被證實(shí)在一部分多發(fā)性骨髓瘤惡性漿細(xì)胞中高表達(dá)，但是PAX5在該腫瘤的發(fā)病和治療中產(chǎn)生的影響以及隱藏在其中的具體機(jī)制目前仍不明確。在本研究中，我們第一次發(fā)現(xiàn)PAX5的高表達(dá)誘導(dǎo)多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞對(duì)一些臨床化療藥物產(chǎn)生抗藥性，并且從PAX5調(diào)節(jié)NF-κB信號(hào)通路激活這一方面很好的解釋了這種現(xiàn)象，該結(jié)果無(wú)論對(duì)于多發(fā)性骨髓瘤的病理研究還是臨床診斷和治療都有著重大的指導(dǎo)意義。同時(shí)，還對(duì)PAX5調(diào)節(jié)NF

8、-κB通路的具體方式和途徑進(jìn)行了深入研究，發(fā)現(xiàn)了PAX5和RIP2的蛋白相互結(jié)合并且闡述了這種結(jié)合作用對(duì)RIP2和下游NF-κB通路帶來(lái)的影響，該發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步增加人們對(duì)PAX5的了解，特別是PAX5在調(diào)節(jié)B細(xì)胞發(fā)育以及B淋巴細(xì)胞腫瘤發(fā)生方面的功能影響。最后，在RIP2 Ser176位點(diǎn)磷酸化對(duì)RIP2泛素化的調(diào)節(jié)方面的研究成果豐富了人們對(duì)于RIP2翻譯后修飾和這些修飾之間的調(diào)節(jié)關(guān)系的認(rèn)識(shí)，其中RIP2參與TNF-α誘導(dǎo)的NF-κB通路激活