Bcl-2抑制劑ABT-737與化療藥物聯(lián)合用藥的藥效學(xué)及機(jī)制研究.pdf

1、研究目的:ABT-737是類似BH-3的小分子物質(zhì),能夠抑制抗凋亡的Bcl-2家族蛋白Bcl-2,Bcl-xL和Bcl-w的活性,引起凋亡蛋白t-Bid, Bad及Bim從抗凋亡蛋白中釋放。ABT-737能夠拮抗Bcl-2和Bcl-xL,但是和另一個抑凋亡蛋白Mcl-1的BH3結(jié)構(gòu)域親和力較小,因而某些實(shí)體瘤或白血病細(xì)胞中抑凋亡蛋白Mcl-1高表達(dá)時,造成腫瘤細(xì)胞對ABT-737耐藥。本文研究了ABT-737與其他化療藥物(吉西他濱,G

2、DC-0941及AS203)聯(lián)合用藥的藥效學(xué)及其機(jī)制研究。
　　研究方法:(1)MTT法檢測ABT-737與化療藥物聯(lián)合用藥抑制人腫瘤細(xì)胞增殖。(2)利用PI單染或Annexin V/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測凋亡率。(3)利用JC1染色法檢測線粒體膜電位變化。(4)Western blotting法檢測蛋白的表達(dá)。(5)流式細(xì)胞術(shù)檢測Bax的轉(zhuǎn)位。(6)熒光定量PCR法檢測mRNA的表達(dá)。(7)免疫沉淀法檢測蛋白與蛋白之間的關(guān)系。

3、(8)利用SiRNA技術(shù)沉默基因表達(dá)。(9)利用質(zhì)粒擴(kuò)增蛋白表達(dá)。(10)建立人源性腫瘤裸小鼠移植瘤模型。
　　研究結(jié)果:(1)吉西他濱與ABT-737聯(lián)合用藥的抗腫瘤藥效學(xué)及其機(jī)制研究:吉西他濱與ABT-737能夠協(xié)同抑制實(shí)體瘤細(xì)胞增殖,吉西他濱與ABT-737合用通過改變線粒體膜通透性,激活Caspase-3,引起PARP的切割,最終誘導(dǎo)95-D肺癌細(xì)胞和5637膀胱癌細(xì)胞發(fā)生凋亡。在ABT-737耐藥細(xì)胞中,我們發(fā)現(xiàn)ABT-

4、737能夠增強(qiáng)去泛素蛋白USP9X與Mcl-1的結(jié)合,抑制Mcl-1的泛素化降解,最終導(dǎo)致Mcl-1的累積而引起ABT-737的耐藥,而吉西他濱可以破壞USP9X與Mcl-1的鏈接,增加Mcl-1的泛素化水平,引起Mcl-1的大量泛素化,最終引起兩藥發(fā)生協(xié)同效果。同時在人肺癌95-D移植瘤裸小鼠模型及原代病人細(xì)胞上,吉西他濱與ABT-737也能協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。(2)GDC-0941與ABT-737聯(lián)合用藥的抗腫瘤藥效學(xué)及其機(jī)制研

5、究:GDC-0941與ABT-737能夠協(xié)同抑制乳腺癌細(xì)胞增殖,GDC-0941與ABT-737合用通過改變線粒體膜通透性,激活Caspase-3,引起PARP的切割,最終誘導(dǎo)MDA-MB-231細(xì)胞和SKBR3細(xì)胞發(fā)生凋亡。此外,GDC-0941能夠促進(jìn)Mcl-1蛋白的泛素化降解,從而引起兩藥發(fā)生協(xié)同效果。同時在人乳腺癌MDA-MB-231移植瘤裸小鼠模型上,GDC-0941與ABT-737也能協(xié)同抑制腫瘤細(xì)胞的增殖。(3)三氧化二砷

6、與ABT-737聯(lián)合用藥的抗腫瘤藥效學(xué)及其機(jī)制研究:三氧化二砷與ABT-737能夠協(xié)同抑制白血病細(xì)胞增殖,三氧化二砷與ABT-737合用通過改變線粒體膜通透性,最終誘導(dǎo)白血病細(xì)胞發(fā)生凋亡。此外,三氧化二砷與ABT-737合用能夠顯著下調(diào)Caspase-8、Caspase-3、Bid等蛋白水平,并伴隨有DNA修復(fù)蛋白PARP、Caspase-8和Caspase-3裂解片段的出現(xiàn)和累積。
　　結(jié)論:(1)吉西他濱與ABT-737合用是