二甲基塞來(lái)昔布增敏ABt-737抗胃癌的作用和機(jī)制研究.pdf

1、目的：ABT-737是類似BH-3的小分子物質(zhì)，能夠抑制抗凋亡的Bcl-2家族蛋白Bcl-2，Bcl-xL和Bcl-w的活性，引起凋亡蛋白Bid，Bad及Bim等從抗凋亡蛋白中釋放。ABT-737能夠拮抗Bcl-2和Bcl-xL，但是和另一個(gè)抑凋亡家族蛋白Mcl-1的親和力較小，因而在某些實(shí)體瘤中Mcl-1蛋白高表達(dá)時(shí)，造成腫瘤細(xì)胞對(duì)ABT-737耐藥。本文研究了ABT-737與二甲基塞來(lái)昔布聯(lián)合用藥的藥效學(xué)及其機(jī)制研究。
　　方

2、法：(1)MTT法檢測(cè)ABT-737與二甲基塞來(lái)昔布(DMC)聯(lián)合用藥抑制人胃癌細(xì)胞增殖。(2)利用PI單染或AnnexinⅤ/PI雙染法流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)凋亡率。(3)利用JC1染色法檢測(cè)線粒體膜電位變化。(4)Western blotting法檢測(cè)蛋白的表達(dá)。(5)激光共聚焦檢測(cè)AIF細(xì)胞內(nèi)定位。(6)熒光定量PCR法檢測(cè)mRNA的表達(dá)。(7)利用SiRNA技術(shù)沉默基因表達(dá)。
　　結(jié)果：二甲基塞來(lái)昔布與ABT-737聯(lián)合用藥較塞來(lái)

3、昔布聯(lián)合ABT-737具有更強(qiáng)的的抗腫瘤作用，且二甲基塞來(lái)昔布不顯著影響細(xì)胞內(nèi)PGE2的水平。二甲基塞來(lái)昔布與ABT-737合用通過(guò)改變線粒體膜通透性，增強(qiáng)Mcl-l的降解，且與Mcl-l的蛋白水平呈明顯的負(fù)相關(guān)，但不顯著上調(diào)Noxa，Bim和Bak等促凋亡蛋白的水平，提示該凋亡作用可能與caspase的激活無(wú)關(guān)。進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)，二甲基塞來(lái)昔布與ABT-737合用能夠激活A(yù)IF的核轉(zhuǎn)位，最終引起兩藥發(fā)生協(xié)同效果。
　　結(jié)論：二甲基塞來(lái)