堿燒傷后角膜新生血管形成的實驗研究.pdf

1、許多角膜疾病，如角膜化學(xué)燒傷、熱燒傷、感染及免疫性疾病等均合并有角膜新生血管形成(cornealneovascularization，CNV)，雖然CNV對感染清除、傷口愈合、抑制角膜溶解等有一定作用，但CNV可破壞角膜正常微環(huán)境，使眼前節(jié)相關(guān)免疫赦免偏離消失，是角膜移植排斥反應(yīng)的高危因素；而且新生血管結(jié)構(gòu)較脆弱，易滲透，常因出血、滲出及繼發(fā)纖維化等導(dǎo)致失明，是最常見的致盲原因之一。近年來對CNV機制的學(xué)說有角膜水腫學(xué)說、缺氧學(xué)說、新生

2、血管生成因子和抑制因子之間失衡學(xué)說及炎癥細(xì)胞浸潤學(xué)說等。盡管有許多學(xué)者提出關(guān)于CNV機制的學(xué)說，該病的發(fā)病機理一直未明確闡明，因此，對CNV發(fā)病機制的研究具有重要意義。本課題在目前CNv研究的基礎(chǔ)上，對其組織病理學(xué)特點和發(fā)病機制做系統(tǒng)深入的研究，共設(shè)計了三部分。 第一部分大鼠角膜堿燒傷后不同時期的組織病理學(xué)變化 目的：觀察堿燒傷后不同時期角膜的組織病理學(xué)變化。方法：Wistmar大鼠30只，制作角膜堿燒傷新生血管模型；并

3、依據(jù)取材時間完全隨機分為6組：分別于堿燒傷后6h、1d、2d、4d、7d及14d取材，蘇木素-伊紅(HE)染色后進行光鏡觀察。結(jié)果：角膜堿燒傷后6h，角膜緣組織已有中性粒細(xì)胞浸潤等明顯急性炎癥變化；堿燒傷后2d，角膜緣出現(xiàn)新生血管芽；堿燒傷后4d，炎癥細(xì)胞浸潤進一步加重，見侵入角膜基質(zhì)層的新生血管管腔樣結(jié)構(gòu)；堿燒傷后7d，炎癥細(xì)胞浸潤仍然嚴(yán)重，角膜基質(zhì)層內(nèi)成熟的、有功能的新生血管增加，管腔粗大．排列緊密；堿燒傷后14d，炎癥細(xì)胞浸潤減少

4、，角膜基質(zhì)層內(nèi)成熟的新生血管數(shù)量減少。結(jié)論：堿性化學(xué)藥物誘導(dǎo)的大鼠CNV模型是研究炎癥性CNV發(fā)生機制和治療的理想模型。炎癥細(xì)胞，特別是中性粒細(xì)胞，參與CNV過程，并可能起重要作用。 第二部分堿燒傷后角膜組織中肝細(xì)胞生長因子、血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子變化的免疫組織化學(xué)研究 目的：觀察堿燒傷后不同時間點角膜組織及正常角膜組織中肝細(xì)胞生長因子(hepatocytegrowthfactor，HGF)和血管內(nèi)皮細(xì)胞生長因子(vasc

5、ularendothelialgrowthfactor，VEGF)的表達，探討它們與CNV的關(guān)系。方法：用免疫組織化學(xué)方法檢測Wistar大鼠正常角膜和角膜堿燒傷后不同時間段HGF和VEGF的表達。結(jié)果：Wistar大鼠正常角膜中，HGF表達于上皮層、基質(zhì)層及內(nèi)皮層；VEGF僅表達于上皮層。角膜堿燒傷后浸潤的炎癥細(xì)胞和新生血管內(nèi)皮細(xì)胞均表達HGF和VEGF。角膜堿燒傷后6h，HGF、VEGF的表達丌始增高，堿燒傷后4d達高峰，傷后7dH

6、GF、VEGF的表達下降，14d后顯著下降。HGF與VEGF的表達具有正相關(guān)性。結(jié)論：HGF和VEGF在角膜堿燒傷后新生血管的形成過程中發(fā)揮著重要作用，兩者協(xié)同促進新生血管的形成。 第三部分大鼠角膜堿燒傷后乙酰肝素酶的表達 目的：觀察堿燒傷后不同時間點角膜組織及正常角膜組織中乙酰肝素酶(heparanase，HPA)的表達，探討其對CNV的作用。方法：用半定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)分析Wistar大鼠正常角