吡非尼酮在大鼠角膜堿燒傷后瘢痕形成中的實驗研究.pdf

1、目的：
　　通過吡非尼酮對大鼠角膜堿燒傷模型的實驗研究，評估抗纖維化藥物吡非尼酮在大鼠角膜堿燒傷后角膜上皮修復(fù)及瘢痕形成中的作用。
　　方法：
　　隨機(jī)選取健康的2月齡Wistar大鼠30只，雌雄不限，體質(zhì)量200-300g，隨機(jī)選擇6只作為正常對照組，24只大鼠于右眼制作堿燒傷模型，堿燒傷模型制作成功后隨機(jī)分為A、B兩組，每組12只。堿燒傷后，實驗組即A組予以5g/L的吡非尼酮滴眼液，對照組B組予以磷酸鹽緩沖液（PB

2、S），每組右眼行滴眼液治療，均每天滴6次連續(xù)14天。各組分別在應(yīng)用滴眼液治療后的第1天、第4天、第7天、第14天，在裂隙燈下觀察角膜損傷面積、角膜混濁情況，并于第7天及第14天分別處死6只大鼠，取下右眼角膜。通過角膜組織的HE染色觀察各組結(jié)構(gòu)的差異，免疫組化檢測CollagenIV、α-SMA、VEGF、CD34的表達(dá)情況，利用蛋白質(zhì)免疫印跡檢測α-SMA、VEGF、PEDF、CD31、CD34、NF-κB的表達(dá)情況。
　　結(jié)果：

3、
　　1、通過對大鼠角膜缺損面積和角膜混濁情況的觀察，結(jié)果顯示：在大鼠角膜缺損面積的比較中實驗組與對照組在堿燒傷后第7天，差異明顯，具有統(tǒng)計學(xué)意義。角膜混濁評分比較在第7天和第14天差異顯著，P<0.05，差異有統(tǒng)計學(xué)意義。
　　2、通過對吡非尼酮實驗組和PBS對照組大鼠角膜組織的HE染色，結(jié)果顯示：在堿燒傷后第7天及第14天，PBS對照組角膜組織中見大量炎性細(xì)胞，而吡非尼酮實驗組中同樣也有炎性細(xì)胞形成，但數(shù)量明顯較對照組少

4、。
　　3、通過對實驗組和對照組大鼠角膜組織的免疫熒光染色，結(jié)果顯示：正常角膜組織中無α-SMA及CD34表達(dá)。VEGF在正常角膜組織中極低表達(dá)，CollagenIV表達(dá)于正常角膜基質(zhì)層。堿燒傷后CollagenIV、α-SMA、VEGF、CD34均有明顯表達(dá)，CollagenIV、α-SMA在第7天及第14天吡非尼酮實驗組的表達(dá)量均明顯低于對照組，累積光密度值（IOD）比較具有統(tǒng)計學(xué)差異，P<0.05，VEGF、CD34則在第1

5、4天差異最為顯著。
　　4、蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果顯示：吡非尼酮實驗組在堿燒傷后PEDF的表達(dá)較高并維持在一定的水平，α-SMA、CD31、CD34、VEGF表達(dá)量均低于PBS對照組，且具有一定的差異。但NF-κB的表達(dá)兩組未見明顯差異。
　　結(jié)論：
　　1、吡非尼酮通過下調(diào)堿燒傷后大鼠角膜組織中CollagenIV、α-SMA的表達(dá)，抑制角膜瘢痕形成。
　　2、吡非尼酮能抑制堿燒傷后大鼠角膜中VEGF的表達(dá)，促進(jìn)P