類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血中調(diào)節(jié)性T、B淋巴細(xì)胞變化的初步研究.pdf

1、本文主要從以下幾個部分進行論述：
　　第一部分 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血中CD4+CD25+Foxp3+Tregs的變化
　　目的：
　　調(diào)節(jié)性T細(xì)胞（RegulatoryT cell，Tregs）參與免疫性疾病的發(fā)病機制目前尚不十分清楚，但其在自身免疫耐受和維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)中起著重要作用，當(dāng)失去平衡時會影響疾病的發(fā)生、活動性。Tregs在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RheumatoidArthritis，RA)發(fā)病、病情進展方面作用如

2、何，臨床研究報告不多。本研究通過應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測RA患者外周血CD4+CD25+FoxP3+ Tregs占CD4+T淋巴細(xì)胞百分比變化，并與正常對照組、患者病情活動情況進行比較分析，探討Tregs與RA發(fā)生、發(fā)展的關(guān)系。
　　方法：
　　選擇RA患者69例，健康對照者(Health control，HC)26例?；颊吲懦渌陨砻庖咝约膊　⒛[瘤、感染及相關(guān)藥物應(yīng)用史。采集并提取外周血單個核細(xì)胞，應(yīng)用流式細(xì)胞儀技術(shù)進行相

3、關(guān)檢測。分析CD4+CD25+FoxP3+ Tregs占外周血CD4+T淋巴細(xì)胞比例和CD4+CD25+FoxP3+ Tregs與疾病活動度（依據(jù)DAS28評分）及臨床疾病活動相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系;同時，將RA患者根據(jù)病程分為3組，即病程不超過1年組，病程1-5年組，病程超過5年組，結(jié)合DAS28評分，將其分為DAS28＞3.2、DAS28＞5.1組進行分析。
　　結(jié)果：
　　1、RA患者組CD4+CD25+FoxP3+ Treg

4、s占外周血CD4+T淋巴細(xì)胞比例總體分析較HC組明顯增多;但在病程不超過1年，DAS28＞3.2組，其CD4+CD25+FoxP3+ Tregs比例呈現(xiàn)減少改變，但與正常對照組無統(tǒng)計學(xué)差異;2、CD4+CD25+FoxP3+ Tregs比例變化與RA患者紅細(xì)胞沉降率(Erythrocytesedimentation rate，ESR)和C反應(yīng)蛋白(C reactive protein，CRP)呈正相關(guān)，但與類風(fēng)濕因子(Rheumatoi

5、d factor，RF)和抗CCP抗體間無明顯相關(guān)性;3、CD4+CD25+FoxP3+ Tregs比例變化與RA患者疾病活動度呈正相關(guān);4、在病程不超過1年組和病程1-5年組，CD4+CD25+FoxP3+ Tregs比例變化在DAS28＞5.1組和DAS28＞3.2組間具有顯著差異，且病程越短差異性越顯著;但在病程超過5年組無明顯差異。
　　結(jié)論：
　　CD4+CD25+FoxP3+ Tregs占外周血CD4+T淋巴細(xì)胞

6、比例在RA組總體表現(xiàn)增多，并且與ESR、CRP、DAS28呈正相關(guān)性，說明CD4+CD25+FoxP3+ Tregs的變化與RA疾病活動相關(guān)。通過對不同病程、疾病活動程度不同（即通過DAS28進行判斷）的患者進行該項分析研究表明，病程越短，CD4+CD25+FoxP3+ Tregs占外周血CD4+T淋巴細(xì)胞比例變化越大，對疾病的影響越大。而CD4+CD25+FoxP3+ Tregs比例的增加除了有機體反應(yīng)性增高因素外，其可能通過多種途徑

7、參與RA發(fā)生、發(fā)展、加重過程。因此，在臨床診治過程中，早期選擇能夠有效調(diào)節(jié)或影響CD4+CD25+FoxP3+ Tregs占CD4+T淋巴細(xì)胞比例及功能的藥物，對控制RA病情變化及進展具有重要意義。
　　第二部分 三種臨床常用治療藥物在體外培養(yǎng)中對CD4+CD25+FoxP3+Tregs變化的影響
　　目的：
　　Tregs通過抑制多種免疫細(xì)胞的增殖和功能參與維持免疫穩(wěn)態(tài)。近年，也有文獻報告其參與機體炎癥反應(yīng)過程。調(diào)整

8、Tregs在外周血中占CD4+T淋巴細(xì)胞比例可能成為臨床上免疫相關(guān)疾病治療的一種新策略。在RA相關(guān)研究中，關(guān)于臨床藥物在RA患者中針對CD4+CD25+FoxP3+ Tregs調(diào)控作用的比較分析報告尚少。本研究選取甲氨蝶呤(Methotrexate，MTX)、糖皮質(zhì)激素(Glucocorticoid,GC)、抗TNF-α靶向藥等目前RA治療中常用藥物，利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，通過流式細(xì)胞儀分析給藥前及細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束時CD4+CD25+FoxP3

9、+ Tregs占CD4+T淋巴細(xì)胞百分變化，探討其在RA臨床治療中對CD4+CD25+FoxP3+ Tregs的作用及影響。
　　方法：
　　選擇RA患者90例，隨機分為5組，分別設(shè)為無藥組、MTX組、GC組、抗TNF-α靶向藥組、聯(lián)合應(yīng)用3種藥物組，選擇健康對照者10例，同時選擇臨床應(yīng)用MTX患者10例。患者排除其他自身免疫性疾病、腫瘤、感染及相關(guān)藥物應(yīng)用史。無菌條件下采集并提取外周血單個核細(xì)胞，利用細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)，通過流式

10、細(xì)胞儀在給藥前及細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)束時進行相關(guān)檢測。分析不同治療藥物和方法對CD4+CD25+FoxP3+ Tregs變化的作用及影響，探討在臨床治療中可能的意義。將各給藥組依據(jù)疾病活動度（依據(jù)DAS28評分分為＞5.1組和＞3.2組）及病程分組（分3組，病程不超過1年組、病程1-5年組、病程超過5年組），探討各藥物在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者不同疾病階段、不同疾病活動程度下對CD4+CD25+FoxP3+Tregs的作用。臨床應(yīng)用MTX患者組（10例）

11、進行應(yīng)用MTX前后CD4+CD25+FoxP3+ Tregs變化的對比研究，同樣進行與疾病活動指標(biāo)、疾病活動度的相關(guān)分析，了解患者體內(nèi)應(yīng)用藥物后對CD4+CD25+FoxP3+ Tregs變化及對疾病治療的影響。
　　結(jié)果：
　　1、對照組進行細(xì)胞培養(yǎng)4天時CD4+CD25+FoxP3+Tregs占CD4+T淋巴細(xì)胞比例為0.26±6.8％，細(xì)胞培養(yǎng)8天時比例升高為0.66±9.58％;
　　2、無藥組進行細(xì)胞培養(yǎng)4天

12、時CD4+CD25+FoxP3+ Tregs占CD4+T淋巴細(xì)胞比例為0.46±5.68％，細(xì)胞培養(yǎng)8天時比例顯著升高，占CD4+T淋巴細(xì)胞比例為0.84±6.86％，與對照組相比均明顯升高;
　　3、在各細(xì)胞培養(yǎng)組中分別加入MTX、GC、抗TNF-α靶向藥及聯(lián)合應(yīng)用3種藥物后，CD4+CD25+FoxP3+ Tregs占CD4+T淋巴細(xì)胞比例較加藥前均顯著減少，其中MTX作用最強，GC次之，聯(lián)合應(yīng)用3種藥物作用略高于單用抗TNF

13、-α靶向藥組;
　　4、GC和聯(lián)合應(yīng)用3種藥物在DAS28＞5.1組中降低CD4+CD25+FoxP3+ Tregs作用強于DAS28＞3.2組;MTX在DAS28＞3.2組作用較強;抗TNF-α靶向藥組在不同疾病活動度作用相似;
　　5、當(dāng)病程不超過1年時，應(yīng)用MTX和GC可以最大程度降低CD4+CD25+FoxP3+ Tregs;當(dāng)病程為1-5年時，應(yīng)用GC可最大程度降低CD4+CD25+FoxP3+Tregs;當(dāng)病程超

14、過5年時，應(yīng)用MTX可最大程度降低CD4+CD25+FoxP3+ Tregs;聯(lián)合應(yīng)用3種藥物在病程超過5年時療效較好;
　　6、10例臨床上給予口服MTX治療后CD4+CD25+FoxP3+ Tregs明顯減少，但下降幅度與體外應(yīng)用MTX組比有所降低。
　　7、臨床應(yīng)用MTX患者治療前后CD4+CD25+FoxP3+ Tregs比例變化與CRP和DAS28變化呈明顯正相關(guān)。
　　結(jié)論：
　　MTX、GC和抗TN

15、F-α靶向藥在RA患者中均可以調(diào)整CD4+CD25+FoxP3+Tregs占CD4+T淋巴細(xì)胞比例的變化，此變化可能是其發(fā)揮臨床治療作用的方式之一。GC由于其具有顯著的影響CD4+CD25+FoxP3+ Tregs占CD4+T淋巴細(xì)胞比例的作用，其可能與迅速控制病情，特別在病程短、重癥類風(fēng)濕患者的治療中發(fā)揮著重要作用有關(guān)。MTX在研究中提示對CD4+CD25+ FoxP3+ Tregs變化影響最大，而且對不同的發(fā)病時間患者均顯示出良好的

16、調(diào)節(jié)作用，這與臨床治療中應(yīng)用相符。只要應(yīng)用的時間、方法及治療劑量正確，即可取得較好療效，這可能也是該藥成為類風(fēng)濕治療基本用藥的重要原因之一。TNF-α靶向藥同樣在調(diào)節(jié)CD4+CD25+FoxP3+ Tregs占CD4+T淋巴細(xì)胞比例方面發(fā)揮與其他兩種藥物相同的作用，且研究結(jié)果提示在疾病早期應(yīng)用效果更好。聯(lián)合應(yīng)用3種藥物的研究指標(biāo)變化，在疾病活動度高的患者組變化最明顯，因此臨床治療中，可以根據(jù)患者情況，選擇副作用更小，療效也較好靶向治療藥

17、物。臨床單獨應(yīng)用MTX組，用藥前后CD4+CD25+FoxP3+ Tregs的變化與體外研究相同，特別是隨著CD4+CD25+FoxP3+ Tregs的變化，疾病活動指標(biāo)不斷降低，二者呈正相關(guān)變化，進一步證明調(diào)整CD4+CD25+FoxP3+ Tregs占CD4+T淋巴細(xì)胞比例及功能，是類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎治療可選途徑之一。由于在疾病不同階段，不同藥物調(diào)整CD4+CD25+FoxP3+ Tregs的能力略有不同。目前，各種藥物影響CD4+CD2

18、5+FoxP3+ Tregs變化的機制尚不十分清楚，分析除與炎癥狀態(tài)的降低改變引起的接續(xù)反應(yīng)有關(guān)外，還應(yīng)該與通過不同途徑直接或間接控制CD4+CD25+FoxP3+Tregs的增殖、凋亡等因素有關(guān)。因此，在臨床治療中，按照不同的病程和疾病活動程度選擇更有效的藥物對RA的治療具有重要意義。
　　第三部分 類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者外周血中CD19+FoxP3+Bregs和CD19+TGF-β+Bregs的變化
　　目的：
　　調(diào)節(jié)

19、性B細(xì)胞(Regulatory B cell，Bregs)在風(fēng)濕性疾病中的作用日益受到重視。Bregs除B10外，另外兩種Bregs亞群即表達FoxP3及TGF-β的Bregs在風(fēng)濕病的研究中報道較少。本研究擬通過檢測類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎伴肺間質(zhì)改變患者外周血中CD19+FoxP3+ Bregs及CD19+TGF-β+ Bregs占CD19+B淋巴細(xì)胞比例，探討其與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎及類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎伴發(fā)肺間質(zhì)改變的關(guān)系。
　　方法：
　　選

20、擇RA患者31例，其中伴肺間質(zhì)改變患者14例;HC者26例。患者排除自身免疫性疾病、腫瘤、感染及相關(guān)藥物應(yīng)用史。采集并提取外周血單個核細(xì)胞，用流式細(xì)胞儀進行相關(guān)檢測。分析其與類風(fēng)濕肺間質(zhì)改變、疾病活動度及臨床相關(guān)指標(biāo)的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1、RA患者組CD19+FoxP3+ Bregs和CD19+TGF-β+ Bregs占外周血CD19+B淋巴細(xì)胞比例較HC組明顯減少;
　　2、在類風(fēng)濕伴肺間質(zhì)改變患者組，CD19

21、+FoxP3+ Bregs的下降與無肺間質(zhì)改變組的變化間無明顯統(tǒng)計學(xué)差異;而CD19+TGF-β+ Bregs比例在類風(fēng)濕伴肺間質(zhì)改變組明顯減少，與無肺間質(zhì)改變組存在明顯差異;
　　3、CD19+FoxP3+ Bregs與RA患者ESR、CRP指標(biāo)呈明顯負(fù)相關(guān);CD19+TGF-β+ Bregs的變化僅在類風(fēng)濕伴肺間質(zhì)改變組與該兩項指標(biāo)負(fù)相關(guān);
　　4、CD19+FoxP3+ Bregs與RA患者DAS28評分呈負(fù)相關(guān)，CD