白血病患者PBMC中αβT細(xì)胞TCR CDR3譜系特征初步分析.pdf

1、目的：初步分析白血病患者外周血單個(gè)核細(xì)胞（peripheral blood mononuclearcell，PBMC）中T淋巴細(xì)胞受體（Tcell receptor，TCR）a鏈、β鏈各家族互補(bǔ)決定區(qū)3（complementarity determining regions3，CDR3）譜系特征和克隆增殖性（溶解曲線(xiàn)單峰）家族的分子特征。
　　 方法：（1）采集4例健康志愿者和15例白血病患者外周血，分離PBMC；（2）提取PB

2、MC中總RNA，并以總RNA為模板合成cDNA；（3）分別以人34個(gè)TCR a鏈和26個(gè)TCRβ鏈胚系可變區(qū)基因家族-TRAV（TCRa chain variable gene，TRAV）和TRBV（TCRβ chain variable gene，TRBV）設(shè)計(jì)上游引物，以共同的TCR a鏈和TCRβ鏈胚系恒定區(qū)基因家族-TRAC（TCR a chainconstant gene，TRAC）和TRBC（TCRβ chain const

3、ant gene，TRBC）設(shè)計(jì)下游引物；用熒光定量PCR（fluorescence quantitative PCR，F(xiàn)Q-PCR）擴(kuò)增TCR a鏈34個(gè)家族和β鏈26個(gè)家族的CDR3區(qū)；（4）用FQ-PCR溶解曲線(xiàn)法分析TCR a鏈、β鏈各家族CDR3區(qū)的單/寡/多克隆性增殖情況；各家族FQ-PCR產(chǎn)物用1.5％瓊脂糖凝膠電泳作初步分析；（5）挑選單/寡克隆增殖性（溶解曲線(xiàn)單峰）家族進(jìn)行普通PCR；PCR產(chǎn)物回收后測(cè)序，分析基因序列

4、、氨基酸序列。
　　 結(jié)果：（1）4例健康志愿者34個(gè)TRAV家族和26個(gè)TRBV家族CDR3區(qū)FQ-PCR溶解曲圖，各家族均顯示為多個(gè)峰型圖；各家族FQ-PCR產(chǎn)物1.5％瓊脂糖凝膠電泳，均于預(yù)測(cè)大小位置顯示條帶；（2）白血病患者TCR34個(gè)TRAV家族和26個(gè)TRBV家族CDR3區(qū)的FQ-PCR溶解曲線(xiàn)圖，多數(shù)家族顯示為多峰圖，部分家族顯示單峰圖，部分家族顯示低峰/無(wú)峰圖；各家族FQ-PCR產(chǎn)物1.5％瓊脂糖凝膠電泳，各家族

5、在預(yù)測(cè)大小位置顯示條帶；白血病患者TRAV和TRBV家族CDR3區(qū)FQ-PCR溶解曲線(xiàn)圖單峰家族基因序列、氨基酸序列不同。
　　 結(jié)論：白血病患者外周血中TRAV和TRBV家族CDR3區(qū)FQ-PCR溶解曲線(xiàn)圖，存在數(shù)量不等的異常峰型（表現(xiàn)為單峰、寡峰、低/無(wú)峰）；白血病患者外周血TRAV和TRBV家族存在克隆性增殖；各增殖家族的基因序列、氨基酸序列不同；是進(jìn)一步研究白血病外周血中T淋巴細(xì)胞腫瘤性質(zhì)和T淋巴細(xì)胞腫瘤抗腫瘤機(jī)制的基礎(chǔ)