Cajal間質(zhì)細(xì)胞在實(shí)驗(yàn)性乳鼠巨結(jié)腸模型不同腸段的分布變化研究.pdf

1、先天性巨結(jié)腸（Hirschsprung’sdisease，HD）是一種腸神經(jīng)系統(tǒng)先天性異常疾病，其發(fā)病機(jī)制尚不十分明確[1]。目前多認(rèn)為遺傳及環(huán)境多種因素綜合作用、共同調(diào)控的結(jié)果[2]。發(fā)病率為1/5000，以男性多見，男：女為4：1。近年來HD的發(fā)病率似有上升趨勢[1,2,3]。主要病理改變?yōu)椴∽兘Y(jié)腸段神經(jīng)節(jié)細(xì)胞缺如，病變結(jié)腸持續(xù)性痙攣，狹窄，腸蠕動(dòng)障礙，近端腸腔擴(kuò)張，內(nèi)容物潴留，形成巨結(jié)腸。新生兒表現(xiàn)為胎糞延遲排出、腸梗阻等癥狀，嬰

2、兒和成人表現(xiàn)為嚴(yán)重便秘、腹脹，常合并小腸結(jié)腸炎、低位腸梗阻，嚴(yán)重影響患兒生活質(zhì)量甚至危及生命[2,4]。研究顯示，HD患兒嚴(yán)重的結(jié)腸功能障礙與Cajal間質(zhì)細(xì)胞(interstitialcellsofCajal，ICC)ICC的分布、數(shù)量及功能密切相關(guān)[4]。ICC廣泛分布于消化道，是胃腸慢波活動(dòng)起搏細(xì)胞及基本電節(jié)律的主要傳播細(xì)胞[5]，并參與胃腸道神經(jīng)信息的傳遞[3]。由于直接人體研究會(huì)受到一定限制，本研究以6～7日齡SD乳鼠為實(shí)驗(yàn)動(dòng)

3、物制備巨結(jié)腸模型，采用ICC的特異標(biāo)志物c-kit多克隆抗體免疫熒光染色，對ICC在巨結(jié)腸模型狹窄段、擴(kuò)張段和移行段的分布規(guī)律進(jìn)行了較詳細(xì)的觀察，探討ICC在HD發(fā)病中的作用，為研究HD腸運(yùn)動(dòng)功能障礙和治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。為日后進(jìn)一步深入研究HD及其相關(guān)并發(fā)癥的病因病理生理機(jī)制、病程演變特征及治療方面等奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　目的用化學(xué)方法選擇性損毀6～7日齡SD乳鼠結(jié)腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞，建立接近于人類HD的實(shí)驗(yàn)性乳鼠巨結(jié)腸模型；通過大體觀察

4、，組織病理學(xué)，NSE和S-100蛋白免疫組化鑒定模型；c-kit多克隆抗體免疫熒光檢測實(shí)驗(yàn)性乳鼠巨結(jié)腸模型結(jié)腸狹窄段、擴(kuò)張段、移行段和正常組中ICC分布、形態(tài)變化，探討ICC在HD發(fā)病中的作用，為探索適應(yīng)范圍廣、安全、有效、無創(chuàng)的治療新方法奠定實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。
　　方法
　　1．9窩(每窩10只乳鼠)6～7日齡SD乳鼠隨機(jī)分為3組，實(shí)驗(yàn)組3窩用0．1％苯扎氯銨(Benzalkoniumchloride，BAC)溶液處理降結(jié)腸15m

5、in，對照組用生理鹽水代替，正常組不做任何處理。
　　2．分別于術(shù)后第1、3、5、6、7周每組隨機(jī)取2只乳鼠處死，通過大體觀察處理段結(jié)腸及近端結(jié)腸形態(tài)變化，組織學(xué)病理學(xué)、NSE和S-100蛋白免疫組織化學(xué)染色觀察結(jié)腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的消除情況。
　　3．c-kit多克隆抗體免疫熒光染色檢測ICC在乳鼠巨結(jié)腸模型結(jié)腸狹窄段、擴(kuò)張段、移行段和對照組的分布、形態(tài)變化。
　　結(jié)果
　　1．實(shí)驗(yàn)組和對照組術(shù)后1～3周大體觀察無明

6、顯變化，術(shù)后4～6周實(shí)驗(yàn)組部分大鼠出現(xiàn)腹脹，排便減少，糞便顆粒變小，處死后大體解剖可見BAC處理段狹窄。術(shù)后7周實(shí)驗(yàn)組大鼠均出現(xiàn)不同程度的排便減少，腹脹，精神萎靡，消瘦，糞便顆粒比對照組和正常組干燥且明顯變小，處死后大體解剖發(fā)現(xiàn)，BAC處理段腸管狹窄痙攣，無蠕動(dòng)，病變近端腸管擴(kuò)張，腸腔內(nèi)容物潴留。對照組及正常組大鼠腸管無此變化。
　　2．實(shí)驗(yàn)組術(shù)后1、3、5、6周組織病理學(xué)可見肌間及粘膜下神經(jīng)節(jié)細(xì)胞逐漸減少，術(shù)后7周肌間及粘膜下神

7、經(jīng)節(jié)細(xì)胞完全消失，腸壁其他結(jié)構(gòu)完整，未發(fā)現(xiàn)瘢痕的形成及炎癥細(xì)胞的浸潤。對照組和正常組可見正常的肌間和粘膜下神經(jīng)節(jié)細(xì)胞。
　　3．實(shí)驗(yàn)組S-100蛋白和NSE表達(dá)在術(shù)后1、3、5、6周位于肌間及粘膜下神經(jīng)節(jié)細(xì)胞逐漸減少，術(shù)后7周肌間及粘膜下S-100蛋白和NSE表達(dá)的神經(jīng)節(jié)細(xì)胞完全消失，對照組及正常組無明顯變化。術(shù)后7周通過大體觀察、實(shí)驗(yàn)組HE染色、免疫組織化學(xué)染色可見肌間和粘膜下神經(jīng)節(jié)細(xì)胞消失，表明巨結(jié)腸模型建立成功。
　　

8、4．c-kit多克隆抗體免疫熒光檢測ICC在實(shí)驗(yàn)性乳鼠巨結(jié)腸不同腸段的分布。對照組結(jié)腸組織ICC主要分布于粘膜下神經(jīng)叢和肌間神經(jīng)叢，ICC呈連續(xù)性分布，相互連接形成網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)。狹窄段結(jié)腸組織ICC的分布顯著減少或消失，較移行段、擴(kuò)張段和對照組均有顯著性差異(P<0．01)，ICC的網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)完全破壞，殘存ICC形態(tài)異常，移行段結(jié)腸組織內(nèi)ICC的分布較對照組和擴(kuò)張段組均減少(P<0．05)，其形態(tài)部分接近正常，但I(xiàn)CC缺乏連續(xù)性分布，未能

9、形成正常的網(wǎng)絡(luò)狀結(jié)構(gòu)。擴(kuò)張段與對照組結(jié)腸組織內(nèi)ICC分布，無顯著性差異(P>0．05)。
　　結(jié)論
　　1．6～7日齡乳鼠用0．1％BAC可成功建立乳鼠巨結(jié)腸模型，該模型與HD具有相似的病理特征；
　　2．結(jié)腸神經(jīng)節(jié)細(xì)胞的數(shù)量及功能與HD的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系；
　　3．NSE、S-100蛋白可作為診斷和鑒別HD的特異性指標(biāo)；
　　4．觀察ICC在乳鼠巨結(jié)腸模型狹窄段、移行段和擴(kuò)張段腸管分布與形態(tài)的差別，發(fā)現(xiàn)