黃芪甲苷對(duì)急性心肌梗死大鼠模型促血管新生的機(jī)制研究.pdf

1、目的:
　　隨著社會(huì)發(fā)展，流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，冠心病是種具有較高致病率和致死率的心血管疾病，是公認(rèn)的人類健康主要?dú)⑹种弧Ｋ幬锔深A(yù)促使缺血心肌治療性血管新生為治療冠心病提供新的手段。傳統(tǒng)中醫(yī)藥黃芪作為治療冠心病常用的中藥材之一，具有較好的臨床療效。黃芪主要活性成分之一的黃芪甲苷能否具有治療性血管新生的藥效還不得而知。本研究旨在通過建立急性心肌梗死大鼠模型，觀察黃芪甲苷對(duì)模型大鼠心肌梗死周圍血管新生的影響，并采用免疫組化、RT-PCR

2、、Western blotting方法觀察了VEGF、Ang-1、NO指標(biāo)的變化，從JAK2/STAT3和MAPK信號(hào)通路探討促血管新生的機(jī)制。
　　方法:
　　1.黃芪甲苷對(duì)急性心肌梗死模型大鼠的促血管新生機(jī)制研究
　　選取健康雄性SD大鼠結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支復(fù)制急性心肌梗死動(dòng)物模型，隨機(jī)分為模型組、丹參多酚酸鹽組、麝香保心丸組、黃芪甲苷低劑量組、黃芪甲苷高劑量組，另設(shè)假手術(shù)組。藥物干預(yù)2周后，收集各組大鼠血清和心臟

3、組織，采用HE染色觀察梗死邊緣區(qū)的病理變化，免疫組化方法檢測(cè)心肌梗死邊緣區(qū)CD34和α-SMA表達(dá)，檢測(cè)微血管數(shù)量和小動(dòng)脈數(shù)量;ELISA法檢測(cè)大鼠血清中VEGF、Ang-1、NO的含量水平;用RT-PCR法檢測(cè)心肌梗死邊緣區(qū)組織中VEGF、Ang-1、eNOSmRNA的表達(dá)情況;用Western blotting檢測(cè)組織中JAK2/STAT3、Raf/ERK1/2的蛋白表達(dá)情況。
　　2.黃芪甲苷對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的促血管新生機(jī)

4、制研究
　　選用人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞培養(yǎng)，用黃芪甲苷不同劑量干預(yù)或JAK2信號(hào)阻斷劑或MAPK信號(hào)阻斷劑干預(yù)，觀察在不同藥物干預(yù)下，細(xì)胞增殖、遷移以及管腔形成情況;采用化學(xué)法，檢測(cè)細(xì)胞上清液中一氧化氮的含量;用Western blotting檢測(cè)細(xì)胞中JAK2/STAT3、ERK1/2、eNOS的蛋白表達(dá)及其磷酸化情況。
　　結(jié)果:
　　1.黃芪甲苷對(duì)急性心肌梗死模型大鼠的促血管新生機(jī)制研究
　　黃芪甲苷能明顯減小大

5、鼠心肌梗死面積，增加大鼠心肌梗死邊緣區(qū)微血管數(shù)量以及小動(dòng)脈數(shù)量，提高大鼠血清中VEGF、Ang-1、NO含量的水平，促使心肌梗死邊緣區(qū)組織中VEGF、Ang-1、eNOSmRNA的表達(dá)增加，其機(jī)制可能是通過上調(diào)JAK2/STAT3和Raf/ERK1/2的蛋白磷酸化表達(dá)有關(guān)。
　　2.黃芪甲苷對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞的促血管新生機(jī)制研究
　　黃芪甲苷在體外能明顯促進(jìn)細(xì)胞增殖、遷移和管腔形成，并且促進(jìn)一氧化氮的分泌;當(dāng)加入JAK2信號(hào)

6、阻斷劑或MAPK信號(hào)阻斷劑干預(yù)后，eNOS蛋白磷酸化水平下降，NO含量降低，細(xì)胞增殖、遷移和管腔形成能力下降。
　　結(jié)論:
　　黃芪甲苷對(duì)缺血性心梗模型大鼠具有促血管新生的作用，其機(jī)制通過JAK2/STAT3和Raf/ERK1/2信號(hào)通路，增加心肌梗死邊緣區(qū)組織中VEGF、Ang-1、eNOSmRNA的表達(dá)，提高VEGF、Ang-1、NO含量的水平;并且在體外研究中，黃芪甲苷通過JAK2/STAT3和ERK1/2信號(hào)通路，調(diào)