FK506、雷帕霉素滴眼液的藥物毒性和藥效學(xué)研究.pdf

1、目的：眼部是免疫性疾病高發(fā)的部位之一，全身應(yīng)用免疫抑制劑時(shí)生物利用度低、副作用大，而國(guó)內(nèi)上市的眼局部應(yīng)用的免疫抑制劑滴眼液只有糖皮質(zhì)激素和環(huán)孢霉素，本實(shí)驗(yàn)通過(guò)對(duì)FK506和雷帕霉素滴眼液的藥物毒性評(píng)價(jià)和藥效學(xué)研究，以期這些高效、安全的免疫抑制劑滴眼液進(jìn)入臨床。
　　 方法：1.人角膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)及鑒定：人角膜上皮進(jìn)行體外培養(yǎng)并進(jìn)行免疫熒光染色鑒定。2.角膜上皮細(xì)胞藥物毒性評(píng)估：接種細(xì)胞至96孔板，加入濃度梯度100、30、1

2、0、3、1、0.3、0.1、0.03μmol/l的藥物，培養(yǎng)24、48、72h后，使用MTT比色試驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞的抑制率并建立量-效曲線，通過(guò)計(jì)算IC50對(duì)比各免疫抑制劑毒性的大小。3.Draize兔眼實(shí)驗(yàn)：8只新西蘭兔隨機(jī)分成2組，分別滴0.1m10.1％FK506、0.2%雷帕霉素滴眼液于一側(cè)眼結(jié)膜囊內(nèi)，另一側(cè)滴入0.1ml生理鹽水作為空白對(duì)照。記錄給藥后24、48、72h角膜、虹膜、結(jié)膜的損傷情況，以Draize眼部刺激試驗(yàn)評(píng)分表示。

3、4.建立大鼠葡萄膜炎模型：將傷寒桿菌內(nèi)毒素200ul注射于SD大鼠后足墊建立葡萄膜炎模型，陰性對(duì)照組注射200ul生理鹽水。于注射前及注射后第4h、12h、24h、48h進(jìn)行裂隙燈檢查，參照Hoekzema的方法對(duì)臨床表現(xiàn)進(jìn)行評(píng)分。5.大鼠葡萄膜炎的藥效學(xué)觀察：12只實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為3組，設(shè)為空白溶劑對(duì)照組、0.1%FK506組、0.2%雷帕霉素組，注射內(nèi)毒素24h后開(kāi)始分別滴空白溶劑、0.1%FK506、0.2%雷帕霉素滴眼液，每日4

4、次，裂隙燈觀察、拍照并參照Hoekzema的方法記錄臨床評(píng)分，統(tǒng)計(jì)學(xué)t檢驗(yàn)檢測(cè)用藥組與陰性對(duì)照組有無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，并進(jìn)行病理學(xué)觀察。
　　 結(jié)果：1.成功建立角膜上皮細(xì)胞體外培養(yǎng)體系，CK3免疫熒光染色陽(yáng)性證明確為角膜上皮細(xì)胞。2.CSA、FK506、雷帕霉素的角膜上皮細(xì)胞毒性均隨濃度、時(shí)間的增加而加大；按IC50計(jì)算，24h、48h、72h的角膜細(xì)胞毒性順序，均為CSA>RAPA>FK506。3.0.1%FK506、0.2

5、%雷帕霉素滴眼液的Draize兔眼刺激實(shí)驗(yàn)證明為無(wú)刺激性。4.成功建立大鼠葡萄膜炎模型，4h開(kāi)始出現(xiàn)癥狀，24h-48h癥狀最明顯，7d基本自然消退。5.0.1%FK506組、0.2%雷帕霉素組內(nèi)毒素注射后1、2d與空白溶劑組無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；3-6d與空白溶劑組有顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；7d與空白溶劑組無(wú)顯著性統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
　　 結(jié)論：1.FK506、雷帕霉素的角膜上皮細(xì)胞毒性均小于環(huán)孢霉素。2.0.1%FK506、0.2%雷帕霉