雷帕霉素納米滴眼液和眼膏治療小鼠干眼癥的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、干眼癥又稱(chēng)角結(jié)膜干燥癥，是一種淚液的質(zhì)和量異常，或淚液動(dòng)力學(xué)異常導(dǎo)致的淚膜不穩(wěn)定和眼表組織損傷并伴有眼部不適癥狀為特征的一類(lèi)疾病。近年來(lái)，干眼癥發(fā)病率逐漸上升，是目前國(guó)內(nèi)外常見(jiàn)的眼表疾病之一?；诿庖叩难装Y反應(yīng)是干眼癥發(fā)病機(jī)制中最關(guān)鍵的因素之一，環(huán)孢霉素A是臨床用于治療干眼癥的有效免疫抑制劑，目前尚無(wú)對(duì)免疫抑制作用更強(qiáng)且全身毒副作用更小的雷帕霉素眼部制劑用于治療干眼癥的相關(guān)實(shí)驗(yàn)研究報(bào)道。
　　 目的：
　　 本研究擬使用

2、新型免疫抑制劑雷帕霉素納米滴眼液和眼膏(同濟(jì)大學(xué)醫(yī)學(xué)院魏靜2007年碩士研究生畢業(yè)課題“雷帕霉素眼部制劑制備及藥物代謝分布”的研究成果)治療小鼠干眼癥，并且通過(guò)各項(xiàng)干眼評(píng)估指標(biāo)進(jìn)行療效觀察，以便尋求到更安全有效的免疫抑制劑治療干眼癥，為日后將雷帕霉素眼部制劑應(yīng)用于臨床試驗(yàn)治療干眼癥提供依據(jù)。
　　 方法：
　　 選擇70只健康6周齡、雌性C57BL/6小鼠，其中10只作為正常組小鼠，其余60只建立小鼠干眼模型。通過(guò)對(duì)小鼠

3、腿部皮下注射5mg/ml的氫溴酸東莨菪堿溶液(抑制小鼠淚液分泌)和將小鼠置于風(fēng)扇前(加速小鼠淚液蒸發(fā))，一共20天，建立小鼠干眼模型。干眼造模成功后將干眼小鼠隨機(jī)分為五組(每組均繼續(xù)皮下注射氫溴酸東莨菪堿溶液)，分別為干眼造模后不予藥物治療(干眼組)；干眼造模后使用0.0125％雷帕霉素納米眼液滴眼(干眼實(shí)驗(yàn)I組)；干眼造模后使用0.025％雷帕霉素納米眼液滴眼(干眼實(shí)驗(yàn)II組)；干眼造模后使用0.25％雷帕霉素眼膏涂眼(干眼實(shí)驗(yàn)III

4、組)；干眼造模后使用0.5％雷帕霉素眼膏涂眼(干眼實(shí)驗(yàn)IV組)。一共觀察4周，檢測(cè)正常組、干眼組與各實(shí)驗(yàn)組小鼠淚液分泌量和角膜熒光素鈉染色變化情況；作病理切片HE染色觀察小鼠結(jié)膜上皮淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)情況、PAS染色觀察小鼠結(jié)膜上皮杯狀細(xì)胞破壞程度及破壞后的恢復(fù)程度；通過(guò)免疫組織化學(xué)SP法和real-timePCR方法觀察小鼠結(jié)膜組織中NF-kB基因表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果：
　　 雷帕霉素治療干眼小鼠2w后，各實(shí)驗(yàn)組均能使干

5、眼小鼠淚液分泌量增多(P<0.05)，結(jié)膜上皮杯狀細(xì)胞數(shù)量增多(P<0.01)(實(shí)驗(yàn)I組和實(shí)驗(yàn)II組卻不能使干眼小鼠結(jié)膜上皮杯狀細(xì)胞數(shù)量增多(P>0.05))，NF-kB基因表達(dá)下降(P<0.01)(其中實(shí)驗(yàn)III組下調(diào)NF-kB基因表達(dá)效果較其余實(shí)驗(yàn)組顯著(P<0.01)，實(shí)驗(yàn)Ⅳ組下調(diào)NF-kB基因表達(dá)效果較其余實(shí)驗(yàn)組差(P=0.000))；
　　 雷帕霉素治療干眼小鼠4w后，各實(shí)驗(yàn)組均能使干眼小鼠淚液分泌量明顯增多(p=0.

6、000)，結(jié)膜上皮杯狀細(xì)胞數(shù)量增多(P<0.05)，NF-kB基因表達(dá)明顯下降(P=0.000)(其中實(shí)驗(yàn)III組下調(diào)NF-kB基因表達(dá)效果較其余實(shí)驗(yàn)組顯著(P=0.000)，實(shí)驗(yàn)Ⅳ組下調(diào)NF-kB基因表達(dá)效果較其余實(shí)驗(yàn)組差(P<0.01))。
　　 結(jié)論：
　　 雷帕霉素眼部制劑能增加小鼠淚液分泌量和結(jié)膜上皮杯狀細(xì)胞的數(shù)量，下調(diào)小鼠結(jié)膜組織中NF-kB基因的表達(dá)從而抑制干眼小鼠結(jié)膜炎癥反應(yīng)，對(duì)小鼠干眼具有良好的治療效果