三甲氧基二苯乙烯對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α及NF-κB活性的調(diào)控作用研究.pdf

1、目的：研究三甲氧基二苯乙烯(BTM)對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞經(jīng)脂多糖誘導(dǎo)后產(chǎn)生TNF-α及NF-κB活化的調(diào)控作用。 方法：RAW246.7小鼠巨噬細(xì)胞株培養(yǎng)長(zhǎng)滿(mǎn)單層后，消化收集細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為3×105/ml，接種于24孔板中，每孔加入細(xì)胞懸液1ml，同時(shí)各孔內(nèi)放入無(wú)菌的蓋玻片以制作細(xì)胞爬片，培養(yǎng)24小時(shí)后棄去培養(yǎng)基，各孔加入濃度分別為5、10、20、40、80μmol/L的BTM和白藜蘆醇1ml/孔培養(yǎng)30min后，再加入10μg

2、/ml的脂多糖(LPS)1ml/孔培養(yǎng)6小時(shí)，然后收集細(xì)胞上清液用L929細(xì)胞結(jié)晶紫染色法檢測(cè)TNF-α的活性，用細(xì)胞毒百分率表示上清液所含TNF-α的活性，抑制百分率表示藥物對(duì)巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α的抑制程度。細(xì)胞爬片用免疫細(xì)胞化學(xué)法檢測(cè)巨噬細(xì)胞中NF-kB的表達(dá)，用陽(yáng)性細(xì)胞率表示NF-κB的活化程度。以加白藜蘆醇的細(xì)胞作為藥物對(duì)照組，以不加藥物僅加LPS的細(xì)胞作為陰性對(duì)照組(LPS組)，以不加藥物亦不加LPS的細(xì)胞作為正常對(duì)照組。

3、 結(jié)果：1.①BTM和白藜蘆醇本身對(duì)L929細(xì)胞無(wú)細(xì)胞毒性；②巨噬細(xì)胞經(jīng)LPS刺激后其上清液的細(xì)胞毒百分率為62.27％；③經(jīng)不同濃度BTM處理后巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α的水平呈劑量依賴(lài)性減少，其上清液的細(xì)胞毒百分率分別為41.72％、32.82％、25.77％、13.50％、4.29％，與LPS組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，各處理組之間比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；④經(jīng)不同濃度白藜蘆醇處理后巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α

4、的水平呈劑量依賴(lài)性減少，其上清液的細(xì)胞毒百分率分別為54.91％、50.00％、45.40％、33.74％、21.78％，與LPS組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，各處理組之間比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；⑤BTM抑制巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-α的能力大于白藜蘆醇，不同濃度下抑制百分率分別為33.00％VS11.82％、47.29％VS19.70％、58.62％VS27.09％、78.32％VS45.81％、93.11％VS65

5、.02％，各組之間比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 2.①巨噬細(xì)胞經(jīng)LPS刺激后NF-κB被活化，其表達(dá)NF-κB的陽(yáng)性細(xì)胞率為98.55±1.36％；②經(jīng)不同濃度BTM處理后，巨噬細(xì)胞表達(dá)NF-κB的陽(yáng)性率呈劑量依賴(lài)性減少，分別為63.17±2.22％、53.28±1.60％、40.97±2.11％、27.06±2.22％、7.05±0.92％，與LPS組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，各處理組之間比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)

6、意義(P<0.01)；⑧經(jīng)不同濃度白藜蘆醇處理后，巨噬細(xì)胞表達(dá)NF-kB的陽(yáng)性率呈劑量依賴(lài)性減少，分別為88.42±4.51％、77.37±2.03％、69.22±3.31％、56.21±1.41％、35.83±2.56％，與LPS組比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，各處理組之間比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)：④BTM抑制巨噬細(xì)胞表達(dá)NF-kB的能力大于白藜蘆醇，不同濃度下其抑制百分率分別為35.90％VS10.28％、45.

7、94％VS21.94％、58.43％VS29.26％、72.54％VS42.96％、92.85％VS63.64％，各組之間比較差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 3.巨噬細(xì)胞經(jīng)BTM和白藜蘆醇處理后，其上清液中TNF-α的細(xì)胞毒百分率和其表達(dá)NF-kB的陽(yáng)性細(xì)胞率均與藥物濃度成負(fù)相關(guān)，而TNF-α的細(xì)胞毒百分率和NF-kB的陽(yáng)性細(xì)胞率成正相關(guān)，相關(guān)性均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。 結(jié)論：1.BTM和白藜蘆醇在濃度為5-