胎球蛋白A在急性肝衰竭中的保護作用研究.pdf

1、目的：(1)探討慢性重型肝炎患者的血清胎球蛋白A (fetuin-A)水平與肝損害程度、預后及腫瘤壞死因子α(tumor necrosis factor-α，TNF-α)的關系。(2)體外觀察在脂多糖(lipopolysaccharide，LPS)刺激下，胎球蛋白A對人外周血單個核細胞(peripheral bloodmononuclear cells，PBMC)分泌TNF-α和IL-6的影響。(3)建立一種簡便、有效、穩(wěn)定的暴發(fā)性肝衰

2、竭 (fulminant hepatic failure，F(xiàn)HF)動物模型，觀察該模型動物不同時間點胎球蛋白A的表達情況；并用胎球蛋白A對FHF模型小鼠進行干預，觀察胎球蛋白A對實驗動物肝功能、肝臟組織學改變、肝細胞凋亡率和病死率的影響，并進一步探討可能的機制。 方法：(1)設立健康對照組、慢性肝炎組和慢性重型肝炎組，慢重肝組中分設恢復組和未恢復組，檢測血清胎球蛋白A、TNF-α、凝血酶原活動度、白蛋白和總膽紅素。 (2)常規(guī)分

3、離培養(yǎng)人外周血單個核細胞，2％臺盼藍進行細胞活力檢測后，分組觀察胎球蛋白A干預對上清液中TNF-α和IL-6的表達量變化(ELISA法)。(3)采用析因試驗法，以小鼠24 h病死率為評價指標，以實驗鼠的血清肝功能和肝組織病理學改變?yōu)轵炞C指標，建立規(guī)范化小鼠FHF模型。(4)利用RT-PCR、western Blot和免疫組化技術，分別從mRNA水平和蛋白質水平研究FHF模型小鼠胎球蛋白A的表達變化。 (5)分組觀察胎球蛋白A的干預對模型

4、小鼠的24h病死率、肝功能、肝組織病理改變(HE染色)、肝細胞凋亡率(原位末端標記法，TUNEL)改變和血清中TNF-α和IL-6的水平(ELISA法)的影響。 結果：(1)血清胎球蛋白A水平在慢性重型肝炎患者(114.02±89.11μg/ml)較健康對照者(317.75±107.83 μg/ml)和慢性肝炎患者(253.14±206.45 μg/ml)明顯降低(P<0.01)；在慢性重型肝炎患者未恢復組(82.53±47.9

5、0 μg/ml)較恢復組(203.05±112.94 μg/ml)明顯降低(P<0.01)；與凝血酶原活動度(Rho=0.493，P<0.01)和血清白蛋白水平顯著正相關(Rho=0.420，P<0.01)，與血清總膽紅素水平顯著負相關(Rho=-0.463，P<0.01)；與血清TNF-α水平顯著負相關(Rho=-0.378，P<0.01)。(2)胎球蛋白A與精胺的聯(lián)合應用顯著抑制了LPS刺激下人PBMC分泌TNF-α(24.89±7

6、.71 pg/ml)和IL-6(112.91±37.80 pg/ml)的水平(P<0.01)。(3)采用析因實驗法篩選出D-GalN 800 mg/kg+LPS 0.04 mg/kg和D-GalN 600 mg/kg+LPS 0.5 mg/kg均為合適建模劑量組合，并通過驗證實驗確證。(4)在FHF小鼠模型中，隨著肝損傷的加重，胎球蛋白A的表達逐漸減少，胎球蛋白AmRNA的表達量下降早于蛋白。免疫組化的結果顯示胎球蛋白A主要在肝細胞的胞

7、漿中表達，部分在胞膜表達。(5)胎球蛋白A干預明顯降低FHF小鼠的病死率(由83％降至25％，P<0.05)，明顯降低血清ALT的水平(由291370.76±29241.68nkat/L降至31585.15±4086.35 nkat/L，P<0.05)，降低血清和肝組織中TNF-α和IL-6的水平(P<0.05)，減輕肝組織炎癥壞死程度，減輕肝細胞凋亡的程度(凋亡指數(shù)由FHF模型組的23.10±7.39降至2.20±2.97，P<0.0

8、5)。 結論：(1)慢性重型肝炎患者的血清胎球蛋白A水平與肝臟損害嚴重程度、血清TNF-α水平及預后密切相關。(2)胎球蛋白A和精胺合用可以有效抑制LPS刺激下人PBMC釋放TNF-α和IL-6。(3)以析因實驗法建立一種規(guī)范、重復性好、費效比低的FHF模型；在該模型中，隨著肝損傷的加重，胎球蛋白A的表達逐漸減少；胎球蛋白A的干預可以改善由D-Galn和LPS誘導的暴發(fā)性肝衰竭，其可能的機制之一是通過抑制TNF-α和IL-6等炎