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文檔簡介
1、目的:
建立小鼠臍帶間充質(zhì)干細(xì)胞UMSCs的分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增的方法;確定分離、培養(yǎng)的細(xì)胞能夠穩(wěn)定傳代,有很強的增殖活性,為以后的細(xì)胞移植創(chuàng)造了較好的前提條件。采用四氯化碳建立小鼠急性肝衰竭模型,并觀察小鼠的一般狀況;了解 UMSCs移植對急性肝衰竭的療效,包括肝功能和肝組織病理變化;觀察移植前后血清中IL-4和IFN-g含量變化;檢測不同時間點肝組織中PD-1 mRNA的水平變化。
方法:
應(yīng)用雙酶消化法消
2、化C57BL/6孕鼠臍帶組織,行貼壁和傳代培養(yǎng),繪制細(xì)胞生長曲線和觀察細(xì)胞形態(tài)。用四氯化碳(CCl4)溶于橄欖油,配成濃度為50%的四氯化碳,予3ml/kg分組腹腔注射給藥。小鼠分為三組,實驗組、移植對照組和空白對照組,分別在7d、14d、21d檢測肝功能。血清IL-4和IFN-g含量采用酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA)測定。取不同時間點的肝組織行石蠟切片和HE染色,觀察肝臟病理變化情況。RT-PCR檢測不同時間點肝組織中PD-1 mRN
3、A的水平表達(dá)變化。
結(jié)果:
1.以膠原酶和胰酶兩步消化法對小鼠UMSCs進(jìn)行了分離培養(yǎng),獲得了成功。兩周之后,主要為長梭形或扁平形的成纖維樣細(xì)胞,細(xì)胞呈束狀密集平行排列。經(jīng)過多次消化、傳代后,細(xì)胞形態(tài)仍為長梭狀,且形態(tài)更加均勻,有很強的增殖活性。群體倍增時間為24h左右。2.成功建立小鼠急性肝衰竭模型。3.移植組小鼠肝功能和造模組比較差異有統(tǒng)計學(xué)差異(P<0.05)。4.移植UMSCs1w、2w、3w后各時間點IL-
4、4和IFN-g濃度和造模組比較,IL-4呈上升趨勢,而 IFN-g呈下降趨勢。5.UMSCs可改善急性肝衰竭小鼠的炎癥浸潤,有利于肝小葉結(jié)構(gòu)恢復(fù)正常。6.在正常的小鼠肝臟組織中,PD-1有一定的表達(dá),造模組12h、24 h、48h PD-1和正常組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。移植UMSCs后24h、48h PD-1和正常組比較,差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05),和造模組比較,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
結(jié)論
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