程序性死亡分子1在HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭發(fā)病機制中的作用.pdf

1、目的：乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)相關(guān)慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure，ACLF)是在慢性肝病基礎(chǔ)上出現(xiàn)的急性或亞急性肝衰竭，導(dǎo)致肝臟合成、解毒、排泄和生物轉(zhuǎn)化等功能發(fā)生嚴(yán)重障礙或失代償，出現(xiàn)以凝血機制障礙和黃疸、肝性腦病、腹水等為主要表現(xiàn)的一組臨床綜合征。病情進(jìn)展快，病死率高、預(yù)后差。其發(fā)病機制十分復(fù)雜，目前得到一致認(rèn)可的結(jié)論是病毒復(fù)制及其蛋白抗原和宿主免疫相作

2、用的結(jié)果。HBV在一定條件下引起宿主免疫應(yīng)答的異常在肝衰竭的發(fā)生中起著至關(guān)重要的作用，也是近年研究的熱點。既往研究重點多側(cè)重于“免疫增強”正向調(diào)節(jié)的研究，認(rèn)為反應(yīng)性T細(xì)胞過度擴增，打破原有的免疫平衡，反應(yīng)性T細(xì)胞(主要是HBV特異性CD8+T細(xì)胞)通過細(xì)胞毒作用不斷攻擊HBV感染的靶細(xì)胞，導(dǎo)致大量靶細(xì)胞變性、壞死；同時通過凋亡機制引起肝細(xì)胞大量凋亡。程序性死亡分子1(programmed death-1，PD-1)及其配體作為負(fù)性共刺激

3、信號，抑制HBV特異性CD8+T細(xì)胞活化增殖，在調(diào)節(jié)反應(yīng)性T細(xì)胞的平衡中發(fā)揮著重要作用。PD-1分子在HBV相關(guān)ACLF患者中表達(dá)情況的相關(guān)報道較少。本研究通過測定HBV相關(guān)ACLF患者外周血T細(xì)胞亞群及病毒特異性CTL細(xì)胞上負(fù)性免疫共刺激調(diào)控分子PD-1的表達(dá)變化，血清中干擾素-γ(interferon，IFN-γ)和白細(xì)胞介素(interleukin10，IL-10)的水平，探討PD-1在HBV相關(guān)ACLF發(fā)病機制中的作用及其對病情

4、預(yù)后的影響。
　　方法：研究對象為河北醫(yī)科大學(xué)第三醫(yī)院住院患者，包括HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭患者26例，為ACLF組，慢性乙型肝炎(chronic hepatitisB，CHB)患者20例，為CHB組。健康體檢者10例，作為正常對照組。以上患者及健康對照者經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)測定均篩選為HLA-A2陽性。檢測患者肝功能、凝血功能、HBV血清學(xué)標(biāo)志物和HBVDNA載量；應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測研究對象外周血CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞、CD3+CD

5、8+T淋巴細(xì)胞、HBV特異性CD8+T淋巴細(xì)胞上PD-1表達(dá)水平；酶聯(lián)免疫吸附法測定血清細(xì)胞因子IFN-γ、IL-10含量。應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計學(xué)軟件進(jìn)行組間比較和相關(guān)分析。
　　結(jié)果：
　　1不同組別外周血HBV抗原肽表位(HBcAg18-27)特異性CD8+T淋巴細(xì)胞頻率(％)
　　HBV抗原肽表位(HBcAg18-27)特異性CD8+T淋巴細(xì)胞頻率在ACLF組、CHB組和正常對照組分別為3.640±0.390

6、、0.629±0.010、0.002±0.001。ACLF組明顯高于CHB組和對照組。CHB組的頻率也明顯高于對照組。差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　2不同組別外周血CD3+CD4+T細(xì)胞、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞、HBV抗原肽表位(HBcAg18-27)特異性CD8+T淋巴細(xì)胞上PD-1的表達(dá)(％)
　　PD-1分子在CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞、CD4+CD8+T淋巴細(xì)胞上的表達(dá)在ACLF組、CHB組和正常對照

7、組分別為32.647±2.489、12.643±0.783、7.132±3.990；23.937±1.317、13.375±0.913、7.718±4.147。ACLF組均明顯高于CHB組和對照組，CHB組也高于對照組。差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P值均<0.05)。
　　PD-1分子在HBV抗原肽表位(HBcAg18-27)特異性CD8+T淋巴細(xì)胞上的表達(dá)在ACLF組和CHB組ACLF組分別為79.216±13.410、69.950±1

8、5.582。ACLF組高于CHB組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。
　　ACLF組按MELD評分分為MELD≥20組和MELD<20組。PD-1分子在CD3+CD4+T淋巴細(xì)胞、CD3+CD8+T淋巴細(xì)胞、HBV抗原肽表位(HBcAg18-27)特異性CD8+T淋巴細(xì)胞上的表達(dá)在MELD>20組和MELD<20組分別為32.431±2.519、32.992±2.533:23.819±1.390、24.112±1.241；77.

9、780±13.179、81.483±14.168。在不同淋巴細(xì)胞上PD-1的表達(dá)，MELD≥20組和MELD<20組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。
　　3 HBV抗原肽表位(HBcAg18-27)特異性CD8+T淋巴細(xì)胞頻率與其PD-1表達(dá)的相關(guān)性
　　ACLF組HBV抗原肽表位(HBcAg18-27)特異性CD8+T淋巴細(xì)胞頻率與其PD-1表達(dá)呈正相關(guān)(r=0.453，P<0.05)；CHB患者HBV抗原肽表位(HB

10、cAg18-27)特異性CD8+T淋巴細(xì)胞頻率與其PD-1表達(dá)呈負(fù)相關(guān)(r=-0.897，P<0.05)。
　　4 HBV抗原肽表位(HBcAg18-27)特異性CD8+T淋巴細(xì)胞上PD-1表達(dá)與HBVDNA的相關(guān)性
　　ACLF組和CHB組PD-1表達(dá)均與HBVDNA呈正相關(guān)(r=0.695，P<0.01；r=0.543，P<0.05)。
　　5 ACLF組PD-1表達(dá)和臨床指標(biāo)的相關(guān)分析
　　PD-1在HBV

11、特異性CD8+T淋巴細(xì)胞的表達(dá)率與總膽紅素(TBIL)呈正相關(guān)(r=0.583，P<0.05)，與ALT、INR均無明顯相關(guān)(r=-0.265，P>0.05；r=0.123，P>0.05)。
　　6血清IFN-γ、IL-10含量的組間比較及其與PD-1表達(dá)的相關(guān)分析
　　血清IFN-γ、IL-10含量在ACLF組、CHB組和對照組分別為39.61±25.93、21.79±9.48、15.99±7.17；31.95±23.74

12、、13.39±7.10、5.67±1.28。血清IFN-γ含量在ACLF組明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)，ACLF組和CHB組、CHB組和對照組之間比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。血清IL-10含量在ACLF組高于CHB組和對照組，CHB組也高于對照組，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。IFN-γ/IL-10比值在ACLF組高于CHB組和對照組，但無統(tǒng)計學(xué)差異(P>0.05)。血清IFN-γ、IL-10含量同PD

13、-1的表達(dá)率均無明顯相關(guān)(P>0.05)。
　　結(jié)論：
　　1 HBV相關(guān)ACLF患者外周血HBV特異性CD8+T細(xì)胞頻率明顯增高，提示HBV特異性CD8+T細(xì)胞在HBV相關(guān)ACLF免疫病理損傷中發(fā)揮重要作用。
　　2 PD-1在HBV相關(guān)ACLF患者外周血CD3+CD4+、CD3+CD8+T細(xì)胞和HBV特異性CTL的表達(dá)增高，且與特異性CTL呈正相關(guān)，提示PD-1通過調(diào)節(jié)CTL在ACLF患者免疫反應(yīng)中發(fā)揮了重要作用。