CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭的發(fā)病中的作用.pdf

1、目的:乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)相關(guān)慢加急性肝衰竭(acute-on-chronic liver failure,ACLF)是由HBV感染引起的肝細(xì)胞大量壞死和凋亡,繼而出現(xiàn)嚴(yán)重肝功能損害和各種并發(fā)癥的臨床綜合征,其發(fā)病急,病情兇險,占我國所有肝衰竭病因的80％以上。HBV相關(guān)ACLF的發(fā)病機(jī)制非常復(fù)雜,目前認(rèn)為是病毒和宿主相互作用的結(jié)果,其中HBV在一定條件下引起的宿主免疫反應(yīng)異常是其發(fā)病的主要環(huán)節(jié)。本

2、研究通過動態(tài)觀察HBV相關(guān)ACLF患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率的變化規(guī)律,肝組織內(nèi)Foxp3+細(xì)胞的表達(dá)及分布,血清干擾素(interferon,IFN)-γ和白細(xì)胞介素-10(interleukin10,IL-10)的水平及兩者的比值,旨在探討CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞與HBV相關(guān)ACLF的發(fā)病及臨床預(yù)后的相關(guān)性。
　　 方法:收集HBV相關(guān)ACLF患者32例,慢性乙型肝炎(chronic hepatiti

3、sB,CHB)患者44例及41例獻(xiàn)血員作為正常對照組,并收集接受肝移植的ACLF患者及正常供體肝組織各6例。HBV相關(guān)慢加急性肝衰竭和CHB的診斷分別符合亞太肝病學(xué)會制定的《慢加急性肝衰竭的共識推薦》、中華醫(yī)學(xué)會肝病學(xué)分會及中華醫(yī)學(xué)會感染病學(xué)分會聯(lián)合制定的2006年版《肝衰竭診療指南》和2005年版《慢性乙型肝炎防治指南》的標(biāo)準(zhǔn)。檢測患者肝功能,凝血功能,HBV血清學(xué)標(biāo)志物和HBV DNA載量;應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血CD4+CD25+

4、調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率,并動態(tài)觀察其在HBV相關(guān)ACLF患者中的變化規(guī)律;免疫組織化學(xué)觀察Foxp3+細(xì)胞在肝組織中的表達(dá)及分布特點(diǎn);逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscription-polymerase chain reaction,RT-PCR)檢測外周血單個核細(xì)胞及肝組織中Foxp3 mRNA的表達(dá);酶聯(lián)免疫吸附法測定血清IFN-γ和IL-10水平。比較外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞在HBV相關(guān)ACLF患者存活組和死亡

5、組間的差異及各自變化趨勢,并與MELD評分進(jìn)行相關(guān)性分析,探討其與臨床預(yù)后的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 1、ACLF組、CHB組及正常對照組人口學(xué)及臨床特點(diǎn)
　　 各組患者的年齡和性別比例具有可比性。ACLF組患者ALT、AST、TBIL、DBIL、血肌酐和國際標(biāo)準(zhǔn)化比率(international normalized ratio,INR)顯著高于CHB組和正常對照組,差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.05)。AC

6、LF組與CHB組比較,血清HBV DNA載量和HBeAg陽性率無統(tǒng)計學(xué)差異。ACLF患者中共22例出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥,其中肝性腦病9例,自發(fā)性細(xì)菌性腹膜炎11例,肝腎綜合征5例及食管靜脈曲張破裂出血2例。
　　 2、ACLF患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率升高
　　 ACLF組外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率(6.33％±1.49％)明顯高于CHB組(vs.4.16％±1.31％)和正常對照組(vs.2.

7、20％±0.69％),差異均具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.001)。而CHB組與正常對照組比較,差異也具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.001)。ACLF組中,有并發(fā)癥患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率(6.51％±1.50％)高于無并發(fā)癥患者(vs.5.94％±1.42％),但兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P=0.55)。
　　 3、ACLF患者肝組織中Foxp3+細(xì)胞的浸潤增多
　　 ACLF患者肝組織浸潤的Foxp3+細(xì)胞

8、(14.7±3.6/hpf)顯著高于CHB患者(vs.4.6±1.4/hpf)和正常對照組(vs.0.4±0.2/hpf),差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.001)。Foxp3+細(xì)胞主要分布在淋巴細(xì)胞聚集及炎癥明顯的匯管區(qū),而肝竇內(nèi)亦可見散在分布。
　　 4、ACLF患者外周血單個核細(xì)胞及肝組織中Foxp3 mRNA的表達(dá)增多
　　 ACLF患者外周血單個核細(xì)胞中Foxp3 mRNA相對表達(dá)量為0.78±0.16,顯著高于

9、CHB組(vs.0.41±0.12,P＜0.05)和正常對照組(vs.0.21±0.06.P＜0.05)。而肝組織中Foxp3 mRNA的相對表達(dá)量在ACLF組,CHB組和正常對照組分別為1.55±0.15,1.00±0.31和0.17±0.04,兩兩比較差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(均P＜0.05)。
　　 5、ACLF患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率與HBV DNA復(fù)制和疾病嚴(yán)重程度正相關(guān)
　　 ACLF患者和CH

10、B患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率均與血清HBV DNA載量成正相關(guān)(ACLF組:r=0.36,P=0.04;CHB組:r=0.62,P＜0.001),但其與ALT水平及HBeAg/抗-Hbe狀態(tài)無相關(guān)性。此外,ACLF患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率與INR(r=0.64,P＜0.001)和MELD評分(r=0.37,P=0.04)成正相關(guān)。
　　 6、ACLF患者血清IFN-γ/IL-10比值失衡及血

11、清IL-10水平與外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率正相關(guān)
　　 血清IFN-γ和IL-10水平在ACLF組(0.96±0.37 pg/ml;0.77±0.33pg/ml)顯著高于CHB組(vs.0.40±0.17 pg/ml;0.48±0.27 pg/ml;均P＜0.001)和正常對照組(vs.0.37±0.17 pg/ml;0.54±0.38 pg/ml;均P＜0.001),但是后兩組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。而IFN-γ

12、與IL-10比值在ACLF組出現(xiàn)失衡,顯著高于CHB組和正常組。血清IL-10水平與外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率在ACLF組呈正相關(guān)(r=0.41,P=0.02)。
　　 7、不同預(yù)后的ACLF患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率的動態(tài)變化規(guī)律
　　 根據(jù)ACLF患者30天的觀察結(jié)果,將其分為存活組和死亡組。死亡組患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率在基線水平顯著高于存活組(6.68％±1.3

13、2％ vs.5.44％±1.18％,P＜0.05),在第7、14、21和28天分別為7.23％±1.34％,7.79％±1.20％,8.82％±0.91％和8.91％±0.18％,并呈現(xiàn)漸增高趨勢;而存活組患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率在各觀測時間點(diǎn)分別為5.53％±1.28％,5.28％±1.03％,4.45％±0.87％和3.47％±0.61％,呈現(xiàn)逐漸降低趨勢。
　　 結(jié)論:
　　 1、HBV相關(guān)AC

14、LF患者外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞及肝組織內(nèi)Foxp3+細(xì)胞水平較CHB患者及正常對照組明顯增多。
　　 2、外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率在ACLF患者中與HBV復(fù)制及疾病嚴(yán)重程度正相關(guān);外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞頻率的基線水平及動態(tài)變化趨勢可作為評價短期預(yù)后的指標(biāo)。
　　 3、HBV相關(guān)ACLF患者IFN-γ/IL-10的比值失衡,血清IL-10水平與外周血CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細(xì)胞