Her2靶向的小干擾RNA藥物輸送系統(tǒng)治療乳腺癌的研究.pdf

1、乳腺癌是女性最常見的惡性腫瘤之一，已成為當今女性的“第一殺手”。臨床上常用的外科手術(shù)以及放療、化療等手段均面臨諸多問題。小干擾RNA(siRNA)藥物是近年來興起的一種新型藥物，為目前多種束手無策的疾病如乳腺癌等的治療帶來了新的曙光。然而，制約siRNA藥物發(fā)展的最關(guān)鍵因素是它的給藥系統(tǒng)，特別是發(fā)展靶向特異輸送siRNA藥物到達癌細胞和癌組織的技術(shù)；解決該問題的關(guān)鍵是發(fā)展能克服siRNA系統(tǒng)給藥的屏障，以及將siRNA藥物特異高效輸送到

2、癌組織和癌細胞的靶向給藥系統(tǒng)。大量研究表明約有25％-30%乳腺癌患者的癌細胞表面人類生長因子受體2(humangrowthfactorreceptors2，Her2)過度表達。本論文利用Her2單鏈片段抗體既具有抗原親和活性，又具有分子小、易穿透細胞外間隙到達深部的腫瘤細胞的特點，構(gòu)建了Her2靶向的小干擾RNA藥物輸送系統(tǒng)，高效地將siRNA輸送到Her2陽性乳腺癌，抑制Her2陽性乳腺癌的生長。
　　 第一部分：制備了可與

3、乳腺癌細胞表面高表達Her2受體特異性結(jié)合的Her2單鏈片段抗體融合蛋白，包括Her2單鏈片段抗體魚精多肽融合蛋白和易化學鍵合的Her2單鏈片段抗體。上述融合蛋白均在大腸桿菌中成功表達，并利用Ni-NTA與融合蛋白上的His-tag結(jié)合，得到了純度較高的目的蛋白。
　　 第二部分：利用了Her2單鏈片段抗體魚精多肽融合蛋白結(jié)合siRNA，將siRNA靶向輸送到Her2陽性乳腺癌細胞，并抑制了Her2陽性乳腺癌的生長。以DNMTs

4、基因為靶基因，通過該融合蛋白靶向輸送siDNMTs到Her2陽性的BT474細胞，有效沉默了目的基因DNMTs的表達，使抑癌基因RASSFIA的啟動子區(qū)發(fā)生去甲基化而被再次激活，從而抑制腫瘤細胞的增殖。經(jīng)尾靜脈注射融合蛋白與siDNMTs的復合物，顯著抑制了裸鼠原位植入Her2陽性乳腺癌的增殖。
　　 第三部分：在聚乙二醇．聚乳酸嵌段聚合物為主要材料的siRNA納米給藥系統(tǒng)的基礎(chǔ)上，通過Her2單鏈片段抗體的修飾，獲得了靶向輸送

5、siRNA到Her2陽性乳腺癌的納米給藥系統(tǒng)，促進了Her2陽性乳腺癌細胞對siRNA的攝取。經(jīng)Her2單鏈片段抗體修飾的納米給藥系統(tǒng)包載siP/K/，尾靜脈注射后，由于其納米效應在腫瘤組織被動富集，并進而通過受體．配體相互作用主動靶向腫瘤細胞，從而實現(xiàn)siRNA藥物被動靶向和主動靶向輸送的結(jié)合，更高效輸送siRNA藥物到Her2陽性的乳腺癌細胞和組織，有效沉默癌基因PLK1的表達，進而促進腫瘤細胞的凋亡，抑制了腫瘤生長，在動物水平提高