NF-1特異性圈套寡核苷酸抑制瘢痕成纖維細胞增殖和膠原基因表達.pdf

1、創(chuàng)面的異常修復導致增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的形成在臨床中非常常見，其發(fā)病機理仍并不完全清楚。迄今的研究已經表明：皮膚組織中成纖維細胞的過度增生以及膠原的合成與降解失衡是導致病理性瘢痕形成的基礎；生長因子和轉錄因子在不同水平協同作用調控著膠原的代謝過程，因而，膠原的代謝異常與它們的調節(jié)作用應該密切相關。已經明確，轉錄因子NF-1不僅能參與細胞周期的調控，還能與I型膠原前α1、α2基因啟動子上的特定序列結合，啟動I型膠原前α1、α2基因的表達。

2、然而，對NF-1在病理性瘢痕組織中是否存在表達異常，它在瘢痕組織形成過程中的調控機制如何迄今尚沒有針對性的研究報道。 本課題通過對人瘢痕疙瘩與正常皮膚組織中NF-1(nulear factor 1) mRNA進行檢測比較，探討瘢痕疙瘩中NF-1的表達變化，在此基礎上設計和人工合成針對NF-1的特異性圈套寡聚核苷酸，將特異性圈套寡聚核苷酸轉染進NIH/3T3細胞，觀察其對細胞增殖活性以及I型膠原前α1、α2基因表達的影響，探討應用

3、人工合成的NF-1特異性圈套寡聚核苷酸干預瘢痕成纖維細胞膠原代謝的可能性，為控制愈合和預防異常瘢痕形成尋找新方法提供實驗依據。 第一部分、瘢痕疙瘩中NF-1 mRNA的表達 目的：通過對人瘢痕疙瘩與正常皮膚組織中NF-1 mRNA的檢測和比較，了解基因在瘢痕疙瘩中發(fā)生的變化，并探討這一變化在異常瘢痕形成中的意義。 方法：收集了3例正常皮膚標本和3例瘢痕疙瘩標本，用半定量PCR和熒光定量PCR分別檢測兩種組織中NF

4、-1在mRNA水平的表達量。 結果：正常皮膚組和瘢痕疙瘩組中NF-1在mRNA水平的表達差異顯著(P<0.05)，瘢痕疙瘩組中NF-1的表達量是正常皮膚組的35倍。 結論：痕疙瘩組織中NF-1 mRNA存在高表達，提示NF-1在病理性瘢痕形成中可能發(fā)揮著重要作用。 第二部分、NF-1特異性圈套寡聚核苷酸抑制NIH/3T3細胞增殖和I型膠原基因表達 目的：研究人工合成的NF-1特異性圈套寡聚核苷酸(NF-1

5、 specific decoy oligodeoxynucleotide，NF-1 specific decoy ODN)抑制NIH/3T3細胞增殖和Ⅰ型膠原前α1、α2基因表達的效果，探討病理性瘢痕的發(fā)生機制以及NF-1 specific decoy ODN在治療病理性瘢痕中的可能性。 方法：設計和人工合成針對轉錄因子NF-1的特異性圈套寡聚核苷酸；用陽離子轉染試劑JetPEI將ODN轉染進入NIH/3T3細胞；分別用流式細胞

6、儀檢測ODN轉染效率，激光共聚焦顯微鏡觀察在細胞的分布；用WST-8法檢測ODN對細胞的毒性以及對細胞增殖的影響；用半定量PCR和熒光定量PCR檢測decoy ODN對細胞Ⅰ型膠原前α1、α2基因表達的抑制作用。 結果：NF-1 specific decoy ODN可被完全轉染進入細胞；進入細胞的ODN呈現明顯的時間和空間分布；轉染100nM NF-1 specific decoy ODN可明顯抑制細胞的增殖，抑制效果在第二天、

7、第三天最明顯，抑制率分別為55％、41％；轉染100nM NF-1 specific decoy ODN可明顯抑制Ⅰ型膠原前α1、α2基因表達。24h后，抑制效果分別為78.8％、72.4％?！?結論：針對轉錄因子NF-1設計和人工合成的decoy ODN可以抑制NIH/3T3的增殖活性和Ⅰ型膠原前α1、α2基因表達。研究結果表明，NF-1特異性圈套寡聚核苷酸在人工控制瘢痕成纖維細胞的過度增殖和膠原異常代謝方面具有潛在的利用價值